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实验背景和目的：
双酚A（BisphenolA，BPA）作为生产环氧树脂和聚碳酸酯的原材料，广泛应用于电子元件、纸张涂料、染料、医疗器械、餐具和婴儿用品的生产。现在BPA污染十分严重。BPA具有类雌激素样作用，虽然其生物活性大约是雌二醇的万分之一，但是还可以影响内分泌系统和生殖系统，是一种潜在的内分泌干扰物，还可能与男性生殖道的异常发育有关。胎儿睾丸主要含三种重要的细胞：胎儿睾丸间质细胞、胎儿支持细胞和原始精细胞。胎儿睾丸间质细胞是男性睾丸内一种重要的内分泌细胞，对于男性生殖道的正常发育至关重要。胎儿睾丸间质细胞的主要功能是合成雄激素睾酮和胰岛素样因子3；胎儿支持细胞主要分泌抗苗勒管激素。胎儿睾丸间质细胞的发育也受到胎儿睾丸其他细胞（如胎儿支持细胞和精细胞）的影响。目前，宫内暴露于BPA对胎儿睾丸细胞（特别是胎儿睾丸间质细胞和胎儿支持细胞）发育的影响尚不清楚。本实验的目的是研究BPA宫内暴露如何影响胎儿睾丸的发育以及其机制。
实验方法：
将妊娠SD大鼠随机分为4组：对照组（玉米油）、处理组(4mg/kg、40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA，其中BPA溶于玉米油中)，每组6只。到妊娠第12天，处理组分别灌胃4mg/kg、40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA，对照组灌胃等量的玉米油。每天对每只雌性SD孕鼠进行一次称重，同时对动物的活动状态进行观察记录。到妊娠第21天，取雄性仔鼠，称重，记录雌雄比，取仔鼠血清测睾酮，取出睾丸，分离每对睾丸，一侧睾丸用波恩氏固定液（Bouin’s）浸泡，用苏木精-伊红组化染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE）测量多核原始生殖细胞数目；用免疫组化染色胎儿睾丸间质细胞进行生物标记（细胞色素P450胆固醇侧链切割酶，CYP11A1和支持细胞标记物SOX9）来进行免疫组织化学分析测量仔鼠睾丸间质细胞数目、细胞大小和细胞群分布，用CYP11A1-增殖标记物和增殖细胞核抗原（PCNA）共染色进行免疫荧光化学分析胎鼠睾丸间质细胞增殖情况。对侧睾丸冷冻来提取RNA，用实时荧光定量核酸扩增检测（qPCR）实时定量测量胎儿睾丸间质细胞｛促黄体生成素受体（Lhcgr）、高密度脂蛋白受体（Scarb1）、类固醇合成急性调节蛋白（Star）、胆固醇侧链裂解酶（Cyp11a1）、3β-羟基类固醇脱氢酶1（Hsd3b1）、17α-羟化酶/20-裂解酶（Cyp17a1）、17β-羟基类固醇脱氢酶3（Hsd17b3）、类固醇生成因子-1（Nr5a1）和胰岛素样生长因子3（Insl3）｝和支持细胞｛促卵泡激素受体（Fshr）、Sry相关的高迁移率族群基因9（Sox9）和抗苗勒管激素（Amh）｝基因的表达水平和Westernblot（WB）测量（LHCGR、CYP17A1、HSD17B3、AMH、BAX和BCL2）的蛋白水平。上述的指标共同评估宫内BPA暴露对胎儿睾丸间质细胞和支持细胞的影响。
实验结果：
体内实验研究发现，BPA不影响孕鼠体重。BPA呈剂量依赖性降低雄性仔鼠血清的睾酮水平，与对照组比较，40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA组有显著差异。
BPA不影响多核原始生殖细胞的数量。免疫组织化学染色分析显示，BPA剂量依赖地减少雄性仔鼠的胎儿睾丸间质细胞CYP11A1阳性细胞数量，与对照组比较，40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA组有显著差异，这表明BPA抑制胎儿睾丸间质细胞的发育。与对照组比较，胎儿支持细胞SOX9阳性的细胞数量没有变化，表明BPA不影响支持细胞数量。
PCNA和CYP11A1荧光化学共染色结果表明BPA剂量依赖性地抑制胎儿睾丸间质细胞的增殖。BPA影响胎儿睾丸间质细胞的细胞簇分布，与对照组比较，40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA显著地增加了胎儿睾丸间质细胞单个细胞簇的比例，而4mg/kg、40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA显著地降低了胎儿睾丸间质细胞小细胞簇（2-4个细胞/簇）的比例，提示BPA促进胎儿睾丸间质细胞早期分化。
BPA在40mg/kg和400mg/kg的剂量下调胎儿睾丸间质细胞的Insl3和Hsd17b3及其蛋白质的表达。400mg/kg的BPA还下调胎儿睾丸间质细胞（Lhcgr、Cyp11a1和Cyp17a1）和支持细胞（Amh）及其蛋白质的表达，提示BPA影响胎儿睾丸的发育，特别是胎儿睾丸间质细胞的发育，BPA也影响胎儿支持细胞的功能。
实验结论：
总之，目前的研究表明，BPA宫内暴露抑制雄性仔鼠胎儿睾丸间质细胞和胎儿支持细胞的发育，可能会造成男性生殖道畸形的情况发生。
双酚A（BisphenolA，BPA）作为生产环氧树脂和聚碳酸酯的原材料，广泛应用于电子元件、纸张涂料、染料、医疗器械、餐具和婴儿用品的生产。现在BPA污染十分严重。BPA具有类雌激素样作用，虽然其生物活性大约是雌二醇的万分之一，但是还可以影响内分泌系统和生殖系统，是一种潜在的内分泌干扰物，还可能与男性生殖道的异常发育有关。胎儿睾丸主要含三种重要的细胞：胎儿睾丸间质细胞、胎儿支持细胞和原始精细胞。胎儿睾丸间质细胞是男性睾丸内一种重要的内分泌细胞，对于男性生殖道的正常发育至关重要。胎儿睾丸间质细胞的主要功能是合成雄激素睾酮和胰岛素样因子3；胎儿支持细胞主要分泌抗苗勒管激素。胎儿睾丸间质细胞的发育也受到胎儿睾丸其他细胞（如胎儿支持细胞和精细胞）的影响。目前，宫内暴露于BPA对胎儿睾丸细胞（特别是胎儿睾丸间质细胞和胎儿支持细胞）发育的影响尚不清楚。本实验的目的是研究BPA宫内暴露如何影响胎儿睾丸的发育以及其机制。
实验方法：
将妊娠SD大鼠随机分为4组：对照组（玉米油）、处理组(4mg/kg、40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA，其中BPA溶于玉米油中)，每组6只。到妊娠第12天，处理组分别灌胃4mg/kg、40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA，对照组灌胃等量的玉米油。每天对每只雌性SD孕鼠进行一次称重，同时对动物的活动状态进行观察记录。到妊娠第21天，取雄性仔鼠，称重，记录雌雄比，取仔鼠血清测睾酮，取出睾丸，分离每对睾丸，一侧睾丸用波恩氏固定液（Bouin’s）浸泡，用苏木精-伊红组化染色法（hematoxylin-eosinstaining，HE）测量多核原始生殖细胞数目；用免疫组化染色胎儿睾丸间质细胞进行生物标记（细胞色素P450胆固醇侧链切割酶，CYP11A1和支持细胞标记物SOX9）来进行免疫组织化学分析测量仔鼠睾丸间质细胞数目、细胞大小和细胞群分布，用CYP11A1-增殖标记物和增殖细胞核抗原（PCNA）共染色进行免疫荧光化学分析胎鼠睾丸间质细胞增殖情况。对侧睾丸冷冻来提取RNA，用实时荧光定量核酸扩增检测（qPCR）实时定量测量胎儿睾丸间质细胞｛促黄体生成素受体（Lhcgr）、高密度脂蛋白受体（Scarb1）、类固醇合成急性调节蛋白（Star）、胆固醇侧链裂解酶（Cyp11a1）、3β-羟基类固醇脱氢酶1（Hsd3b1）、17α-羟化酶/20-裂解酶（Cyp17a1）、17β-羟基类固醇脱氢酶3（Hsd17b3）、类固醇生成因子-1（Nr5a1）和胰岛素样生长因子3（Insl3）｝和支持细胞｛促卵泡激素受体（Fshr）、Sry相关的高迁移率族群基因9（Sox9）和抗苗勒管激素（Amh）｝基因的表达水平和Westernblot（WB）测量（LHCGR、CYP17A1、HSD17B3、AMH、BAX和BCL2）的蛋白水平。上述的指标共同评估宫内BPA暴露对胎儿睾丸间质细胞和支持细胞的影响。
实验结果：
体内实验研究发现，BPA不影响孕鼠体重。BPA呈剂量依赖性降低雄性仔鼠血清的睾酮水平，与对照组比较，40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA组有显著差异。
BPA不影响多核原始生殖细胞的数量。免疫组织化学染色分析显示，BPA剂量依赖地减少雄性仔鼠的胎儿睾丸间质细胞CYP11A1阳性细胞数量，与对照组比较，40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA组有显著差异，这表明BPA抑制胎儿睾丸间质细胞的发育。与对照组比较，胎儿支持细胞SOX9阳性的细胞数量没有变化，表明BPA不影响支持细胞数量。
PCNA和CYP11A1荧光化学共染色结果表明BPA剂量依赖性地抑制胎儿睾丸间质细胞的增殖。BPA影响胎儿睾丸间质细胞的细胞簇分布，与对照组比较，40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA显著地增加了胎儿睾丸间质细胞单个细胞簇的比例，而4mg/kg、40mg/kg和400mg/kg剂量的BPA显著地降低了胎儿睾丸间质细胞小细胞簇（2-4个细胞/簇）的比例，提示BPA促进胎儿睾丸间质细胞早期分化。
BPA在40mg/kg和400mg/kg的剂量下调胎儿睾丸间质细胞的Insl3和Hsd17b3及其蛋白质的表达。400mg/kg的BPA还下调胎儿睾丸间质细胞（Lhcgr、Cyp11a1和Cyp17a1）和支持细胞（Amh）及其蛋白质的表达，提示BPA影响胎儿睾丸的发育，特别是胎儿睾丸间质细胞的发育，BPA也影响胎儿支持细胞的功能。
实验结论：
总之，目前的研究表明，BPA宫内暴露抑制雄性仔鼠胎儿睾丸间质细胞和胎儿支持细胞的发育，可能会造成男性生殖道畸形的情况发生。