第一部分异丙肾上腺素“6+1”方式诱导SD大鼠缺血性心律失常模型的建立与分析目的:建立一种较为理想的心律失常大鼠模型,并观察其心电图、心肌组织形态学、心肌酶、肌钙蛋白、炎症因子及氧化应激变化情况,以对模型进行分析与评价,为进一步开展相关研究奠定基础。方法:1.动物分组:50只健康雄性SD大鼠,以随机数字表法划分为对照组和4个实验组:皮下注射（SC）组、腹腔注射（IP）组、2+1组和6+1组,每组10只。2.药物干预:SC组:予以异丙肾上腺素（ISO）5mg/kg皮下注射,连续2天;IP组:予以ISO 5mg/kg腹腔注射,连续2天;2+1组:予以ISO 5mg/kg皮下注射,连续2天后,ISO 3mg/kg腹腔注射1天;6+1组:予以ISO 5mg/kg皮下注射,连续6天后,ISO 3mg/kg腹腔注射1天诱导成模。3.指标分析:BL-420F系统记录大鼠心电图变化;HE、Masson染色观察心肌组织病理形态学变化;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清肌钙蛋白（c Tn I）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平;全自动生化分析仪检测血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）水平。4.统计学处理:计数资料以百分率（%）表示,组间比较采用卡方检验。计量资料以均数±标准差（X±S）表示,组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA）,检验水准α=0.05。结果:1.心律失常发生情况:与对照组比较,4个实验组大鼠的室早和（或）室速发生率不同程度升高,其中6+1组显著升高（P＜0.01）,并出现持续性室性心动过速及房室传导阻滞现象。2.心律失常评分:与对照组比较,6+1组大鼠心律失常评分明显增加（P＜0.01）。与SC组或IP组相比,6+1组大鼠的心律失常评分明显增加（P＜0.01）。3.心脏指数:与对照组比较,4个实验组大鼠心脏指数均明显增大（P＜0.01）。6+1组大鼠心脏指数明显均高于SC组、IP组、2+1组（P＜0.01）。4.心肌组织形态学变化:4个实验组大鼠出现不同程度的心肌纤维排列紊乱、边界不清、染色不均,其中6+1组大鼠尤甚,并有炎症细胞浸润。5.心肌损伤情况比较:4个实验组大鼠血清CK、LDH、c Tnl含量明显增多（P＜0.01或P＜0.05）。2+1组与6+1组大鼠血清CK、LDH含量明显高于IP组（P＜0.05）。6.氧化应激情况比较:6+1组大鼠血清SOD明显减低（P＜0.01）,MDA及NO明显升高（P＜0.05）。7.血清炎症因子水平比较:6+1组大鼠血清TNF-α和IL-6水平均明显升高（P＜0.05）,其中TNF-α明显升高于SC组与IP组,IL-6明显升高于2+1组（P＜0.05）。第二部分养心定悸胶囊对异丙肾上腺素诱导的缺血性心律失常大鼠的心肌保护作用目的:观察SD大鼠的心律失常发生情况、心肌组织病理变化情况及心肌细胞损伤情况,探讨养心定悸胶囊对ISO诱导的心律失常大鼠的心肌保护作用。方法:1.动物分组与模型制备:60只健康雄性SD大鼠以随机数字表法分为6组:对照组、模型组、普萘洛尔组和养心定悸低、中、高剂量组,每组10只。ISO注射诱导SD大鼠心律失常。2.药物干预:各组大鼠灌胃给药,1次/日,连续7日,普萘洛尔组给予普萘洛尔15mg/（kg·d）;养心定悸低、中、高剂量组分别给予养心定悸胶囊0.5g/（kg·d）、1g/（kg·d）、2g/（kg·d）;对照组和模型组给予等体积0.9%氯化钠。3.指标检测:BL-420F系统记录大鼠心电图变化;ELISA检测血清c Tn I水平;HE染色观察心肌细胞形态结构;Massson染色观察心肌胶原纤维改变;TTC染色观察心肌组织缺血面积。4.统计学处理同第一部分。结果:1.养心定悸胶囊对大鼠心电图的影响:模型组ST段明显抬高（P＜0.01）,室早、室速频发;普萘洛尔组、养心定悸组ST段抬高程度减轻（P＜0.05）,室早、室速出现时间延迟及发生次数减少（P＜0.01或P＜0.05）。2.养心定悸胶囊对心律失常评分的影响:模型组大鼠的心律失常评分显著增加（P＜0.01）;普萘洛尔组、养心定悸组高剂量组大鼠心律失常评分明显降低（P＜0.05）。3.养心定悸胶囊对心脏指数的影响:模型组的大鼠心脏指数显著增大（P＜0.01）;普萘洛尔组、养心定悸中高剂量组大鼠的心脏指数明显减小（P＜0.01）。4.养心定悸胶囊对心肌损伤的影响:4.1 TTC染色:模型组心肌可见明显的苍白色缺血梗死灶;与模型组比较,普萘洛尔组、养心定悸组大鼠心肌损伤面积明显降低（P＜0.01或P＜0.05）。4.2血清c Tn I含量:模型组大鼠血清c Tn I含量显著性升高（P＜0.01）。与模型组比较,普萘洛尔组、养心定悸组血清c Tn I含量明显降低（P＜0.01或P＜0.05）。5.养心定悸胶囊对心肌组织病理形态学的影响:5.1 HE染色:模型组心肌细胞排列紊乱,可见炎症细胞浸润;与模型组比较,普萘洛尔组、养心定悸组心肌细胞排列多为整齐,着色较均匀,炎症细胞浸润减轻。5.2 Masson染色:模型组心肌纤维排列紊乱,染蓝色胶原纤维增多;与模型组比较,普萘洛尔组、养心定悸组多以紫红色心肌组织为主,蓝色胶原纤维减少。第三部分养心定悸胶囊拮抗异丙肾上腺素诱导的缺血性心律失常作用机制的初步研究目的:观察大鼠血清炎症因子水平及氧化应激指标变化,并观察心肌细胞钠钾ATP酶（Na+-K+-ATPase）、钙镁ATP酶(Ca2+-Mg2+-ATPase)活性、钙离子(Ca2+)浓度及缝隙连接蛋白43（Cx43）表达,初步探讨养心定悸胶囊拮抗异丙肾上腺素诱导的缺血性心律失常作用机制。方法:1.动物分组与模型制备:同第二部分。2.药物干预:同第二部分。3.检测指标与方法:末日大鼠麻醉后,股动脉取血,取大鼠心脏组织。采用自动生化仪测血清MDA、SOD、还原型谷胱甘肽（GSH）水平;采用ELISA法测血清TNF-α、IL-6、IL-1β水平;采用酶标仪检测心肌组织Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性及Ca2+浓度;采用免疫组织化学技术检测Cx43蛋白表达;采用实时定量RT-PCR检测心室Cx43表达;采用Western blot检测Cx43及磷酸化Cx43（P-Cx43）蛋白表达。4.统计学处理同第一部分。结果:1.养心定悸胶囊对大鼠心肌细胞氧化应激的影响:模型组大鼠血清SOD、GSH水平显著减低（P＜0.01）,MDA显著升高（P＜0.01）;普萘洛尔组、养心定悸组大鼠SOD、GSH水平多明显上升,MDA水平多明显降低（P＜0.01或P＜0.05）。2.养心定悸胶囊对大鼠血清炎症因子水平的影响:模型组大鼠血清TNF-α和IL-6水平明显升高（P＜0.05或P＜0.01）;普萘洛尔组、养心定悸组血清TNF-α、IL-6水平不同程度降低（P＜0.05或P＜0.01）。3.养心定悸胶囊对大鼠心肌细胞ATPase活性及Ca2+浓度的影响:模型组大鼠Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性明显降低而Ca2+浓度升高（P＜0.01）;普萘洛尔组、养心定悸组Na+-K+-ATPase、Ca2+-Mg2+-ATPase活性不同程度升高且Ca2+浓度降低（P＜0.05或P＜0.01）。4.养心定悸胶囊对大鼠心肌组织Cx43表达的影响4.1免疫组化:对照组Cx43表达为强阳性且分布正常;模型组Cx43表达明显减弱（P＜0.01）,位于侧-侧连接处。与模型组相比,普萘洛尔组、养心定悸胶高剂量组Cx43蛋白表达显著上升（P＜0.01）且多位于端-端连接处。4.2实时定量RT-PCR法测定心室组织Cx43m RNA表达:与对照组相比,模型组Cx43m RNA表达水平降低,普萘洛尔组、养心定悸组Cx43m RNA表达水平有所提高,但无显著性差异（P＞0.05）。4.3 Western blot测定心室组织Cx43、P-Cx43蛋白表达:与对照组相比,模型组大鼠心肌Cx43、P-Cx43蛋白表达明显减弱（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较,普萘洛尔组及养心定悸胶囊组Cx43、P-Cx43蛋白表达多明显增强（P＜0.05或P＜0.01）。结论:1.ISO皮下-腹腔联合注射比单一途径更易诱发心律失常;ISO“6+1”方式可建立一种较稳定的大鼠心律失常模型;氧化应激和炎症反应诱发的心肌细胞损伤可能是其重要机制。2.养心定悸胶囊可有效减轻ISO诱导的SD大鼠缺血性心律失常,并发挥心肌保护作用,其机制可能与抑制氧化应激及炎症反应、改善心肌组织ATPase活性、减轻心肌细胞Ca2+超载、逆转Cx43重构有关。