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目的:通过初步观察一贯煎对二乙基亚硝胺(DEN)诱导实验性SD大鼠肝脏癌变组织相关肿瘤观察指标的影响,评价一贯煎对肝癌相关指标的改善是否有积极意义,探讨中药方剂对临床肝癌的疗效。在本研究思路上,把传统中医药理论与现代分子生物学理论结合起来,探究中医药治疗肝癌的分子机理,进而为开展中医药经典方药临床防治肝癌提供理论依据。
方法:SPF级雄性SD大鼠40只,1周适应性喂养后选入实验,随机分为空白组、模型组、一贯煎低剂量组、一贯煎高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其他三组从实验开始起给所有大鼠腹腔注射的DEN,50mg/kg,两次/周,至十六周。从实验开始空白组及模型组以无菌蒸馏水灌胃10ml/kg、每天一次;低剂量组以一贯煎中药溶液灌胃,1mg/ml10ml/kg每天一次;高剂量组以一贯煎中药溶液灌胃,2mg/ml10ml/kg每天一次,至十六周。观察各组大鼠在实验过程中精神活动、饮水进食、毛色等变化,称重并记录各组大鼠体重。第十六周周末腹腔注射10%水合氯醛在麻醉大鼠后,取出肝脏、脾脏,观察肝脏病理改变,称重计算肝脏指数、脾脏指数,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)与蛋白免疫印迹法(WB)检测大鼠肝脏组织促癌标志基因PCNA及抑癌标志基因BAX的表达水平。
结果:1、实验结果显示一贯煎提高了DEN诱导的SD肝癌大鼠模型的生存率,其中模型组、一贯煎低剂量组和一贯煎高剂量组的生存率分别为50%、80%及90%。各组大鼠体重均呈逐渐上升趋势,与模型组相比,一贯煎高剂量组大鼠体重显著高于模型组大鼠体重(p<0.01),一贯煎低剂量组大鼠体重较高于模型组大鼠体重(p<0.05)。2、一贯煎对大鼠肝脏指数、脾脏指数的影响结果显示,与空白组大鼠相比模型组大鼠肝脏指数、脾脏指数都显著升高(p<0.01);与模型组大鼠相比,一贯煎低剂量组大鼠与一贯煎高剂量组大鼠肝脏指数、脾脏指数也都显著降低(p<0.01)。
3、RT-qPCR结果显示,与空白组大鼠相比模型组大鼠PCNA转录水平显著升高(p<0.01),而BAX转录水平无明显变化;与模型组大鼠相比,一贯煎高低剂量组大鼠肝癌组织PCNA,BAX转录水平无明显变化。
4、WB结果显示,与空白组大鼠相比模型组大鼠PCNA翻译水平显著升高,而BAX翻译水平显著降低;与模型组大鼠相比,一贯煎低剂量组大鼠肝癌组织PCNA翻译水平上升,一贯煎高剂量组大鼠肝癌组织PCNA翻译水平下降,而一贯煎低剂量组大鼠肝癌组织BAX翻译水平都上升。
结论:一贯煎干预大鼠肝脏癌变过程中能减轻大鼠肝脏的病理改变,肝脏组织的PCNA蛋白水平显著下降,BAX蛋白水平显著上升。实验结果表明一贯煎可通过调节肝癌细胞增殖和凋亡,对大鼠肝脏癌变过程发挥改善作用,对临床预防和治疗肝癌具有一定的借鉴意义。
方法:SPF级雄性SD大鼠40只,1周适应性喂养后选入实验,随机分为空白组、模型组、一贯煎低剂量组、一贯煎高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其他三组从实验开始起给所有大鼠腹腔注射的DEN,50mg/kg,两次/周,至十六周。从实验开始空白组及模型组以无菌蒸馏水灌胃10ml/kg、每天一次;低剂量组以一贯煎中药溶液灌胃,1mg/ml10ml/kg每天一次;高剂量组以一贯煎中药溶液灌胃,2mg/ml10ml/kg每天一次,至十六周。观察各组大鼠在实验过程中精神活动、饮水进食、毛色等变化,称重并记录各组大鼠体重。第十六周周末腹腔注射10%水合氯醛在麻醉大鼠后,取出肝脏、脾脏,观察肝脏病理改变,称重计算肝脏指数、脾脏指数,利用荧光定量PCR(RT-qPCR)与蛋白免疫印迹法(WB)检测大鼠肝脏组织促癌标志基因PCNA及抑癌标志基因BAX的表达水平。
结果:1、实验结果显示一贯煎提高了DEN诱导的SD肝癌大鼠模型的生存率,其中模型组、一贯煎低剂量组和一贯煎高剂量组的生存率分别为50%、80%及90%。各组大鼠体重均呈逐渐上升趋势,与模型组相比,一贯煎高剂量组大鼠体重显著高于模型组大鼠体重(p<0.01),一贯煎低剂量组大鼠体重较高于模型组大鼠体重(p<0.05)。2、一贯煎对大鼠肝脏指数、脾脏指数的影响结果显示,与空白组大鼠相比模型组大鼠肝脏指数、脾脏指数都显著升高(p<0.01);与模型组大鼠相比,一贯煎低剂量组大鼠与一贯煎高剂量组大鼠肝脏指数、脾脏指数也都显著降低(p<0.01)。
3、RT-qPCR结果显示,与空白组大鼠相比模型组大鼠PCNA转录水平显著升高(p<0.01),而BAX转录水平无明显变化;与模型组大鼠相比,一贯煎高低剂量组大鼠肝癌组织PCNA,BAX转录水平无明显变化。
4、WB结果显示,与空白组大鼠相比模型组大鼠PCNA翻译水平显著升高,而BAX翻译水平显著降低;与模型组大鼠相比,一贯煎低剂量组大鼠肝癌组织PCNA翻译水平上升,一贯煎高剂量组大鼠肝癌组织PCNA翻译水平下降,而一贯煎低剂量组大鼠肝癌组织BAX翻译水平都上升。
结论:一贯煎干预大鼠肝脏癌变过程中能减轻大鼠肝脏的病理改变,肝脏组织的PCNA蛋白水平显著下降,BAX蛋白水平显著上升。实验结果表明一贯煎可通过调节肝癌细胞增殖和凋亡,对大鼠肝脏癌变过程发挥改善作用,对临床预防和治疗肝癌具有一定的借鉴意义。