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目的:研究水蛭提取液对凝血酶诱导的血管内皮细胞释放血栓素B2(thromboxane B2, TXB2)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、一氧化氮(nitrogen monoxide,NO)、6-酮-前列腺素F1α (6-keto-prostaglandin F1α,6-keto-pGF1α)的影响,表达组织因子(tissue factor,TF)、组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)的影响。用体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(HUVECs)作为受试对象,研究水蛭活性提取液的抗凝作用机制。方法:采用含有10%新生牛血清的1640培养液体外培养HUVECs细胞,将已融合的细胞随机分为空白对照组(等体积RPMI1640培养液)、凝血酶刺激组(10kU/L)及水蛭提取液高剂量组(0.6mg/mL+10kU/L凝血酶)、中剂量组(0.3mg/mL+10kU/L凝血酶)、低剂量组(0.15mg/mL+10kU/L凝血酶)5组,培养12h后,收集细胞培养上清液及细胞冻融液,用来测试下面的指标:酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中TXB2、6-keto-pGF1α的含量,放射免疫法检测细胞培养上清液中ET-1的含量,发色底物法测定细胞培养上清液中TFPI、细胞冻融液中TF的活性,硝酸还原酶法测定细胞培养上清液中NO的含量。结果:1.凝血酶组HUVECs细胞间隙略增宽,呈单层排列,边界清楚,凝血酶能诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤。水蛭活性提取液各剂量组细胞形态正常,细胞生长状况类似于空白对照组,实验结果表明凝血酶能诱导血管内皮细胞损伤而水蛭活性提取物则对凝血酶诱导的损伤具有保护作用。2与空白对照组比较,凝血酶刺激VEC释放TXB2(p<0.01),抑制VEC释放6-keto-pGF1α(p<0.01)。与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液各剂量组TXB2含量降低(p<0.01),6-ket-opGF1α含量升高(p<0.01),表明水蛭提取液可能具有抑制血小板聚集的作用。3与空白对照组比较,凝血酶促进血管内皮细胞表达(p<0.01),抑制血管内皮细胞释放TFPI(p<0.01)。与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液能抑制血管内皮细胞对TF的表达(p<0.01),促进血管内皮细胞对TFPI的释放(p<0.01),表明水蛭提取液具有抗凝作用。4.水蛭提取液各剂量组能显著促进HUVECs释放NO(与凝血酶刺激组比较P<0.01),抑制]HUVECs分泌ET-1(与凝血酶刺激组比较P<0.01)。结论:1.水蛭提取液对凝血酶诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用2.水蛭活性提取液抗凝作用较强,其作用机制可能是通过抑制凝血酶所启动的凝血途径。