大豆GmMFT基因克隆、表达模式及功能分析

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MFT(MOTHER OF FT AND TFL1)基因属于磷脂酰乙醇胺结合蛋白(PEBP)基因家族,广泛存在于多细胞陆生植物中。最初的研究认为MFT基因可能是个开花调控因子,但是后来的一些关于MFT基因的转化和表达分析研究表明MFT基因更可能在种子发育或萌发过程中起作用。对MFT基因进行研究,明确其在种子发育或萌发过程中的作用,将为植物种质的分子改良提供一定的理论参考。本研究从大豆中克隆到GmMFT基因,对它进行了生物信息学分析,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分析了它在不同组织器官和发育过程的时空表达模式,并在拟南芥中过表达该基因以研究其功能。与此同时,因为合适内参基因的选择对于获得正确的RT-qPCR结果至关重要,所以为了更好地研究GmMFT基因在种子发育和萌发过程的表达模式,本研究还评价了18个大豆候选内参基因在34个不同的种子样本中的表达稳定性。主要研究结果如下:1.在大豆种子发育过程中最适合的内参基因是TUA5和UKN2,在种子萌发过程最适合的内参基因是Glyma05g37470和Glyma08g28550,在总样本中则需要用Glyma05g37470、Glyma08g28550、Glyma18g04130和UKN24个内参基因做标准化分析。2. GmMFT基因主要在大豆种子中表达,并且在种子发育过程中表达量逐渐升高,在种子萌发过程中表达量逐渐降低。GmMFT基因的这种表达模式暗示其很可能调控大豆种子发育和萌发。3. GmMFT蛋白同拟南芥AtMFT和小麦TaMFT蛋白一样定位在细胞核和细胞质中,暗示其可能是一个转录因子。4.转基因拟南芥表型分析结果表明GmMFT基因可能抑制种子萌发,并不参与开花时间或种子发育的调控。分析GmMFT转基因和野生型种子中一些与萌发相关的基因的表达情况,我们发现GmMFT基因可能从两方面来抑制种子萌发:一方面通过促进ABA合成基因的表达,同时抑制ABA降解基因的表达来促进ABA在种子中的积累以抑制种子萌发;另一方面通过抑制GA合成基因的表达,同时促进GA降解基因的表达来抑制GA在种子中的积累进而抑制萌发。
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