余甘子为叶下珠属植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实,为常用藏药,与诃子、毛诃子在藏药中并称为“三大果”。历代医家认为,余甘子具有润肺化痰,生津止渴,消食化积,清热解毒之功效。余甘子主要含有鞣质、小分子酚酸、黄酮、挥发油、维生素等化学成分,具有明显的抗衰老、抗肿瘤、降脂、降压等作用。本论文在课题组前期研究工作的基础上,建立人肠内菌群及大鼠肝微粒体体外代谢模型,对余甘子的鞣质部位进行体外代谢研究。探讨余甘子鞣质部位在人肠道菌群、及肝微粒体作用下的成分变化,为进一步研究余甘子鞣质部位代谢途径和药效物质奠定基础。建立同时评价6种CYP450酶活性的“Cocktail”探针底物大鼠肝微粒体体外代谢模型,研究余甘子鞣质部位及其指标性成分对CYP450不同亚型酶活性的影响,为余甘子临床联合用药提供依据。具体研究内容如下:1余甘子鞣质部位制备及含量测定采用课题组已建立的藏药余甘子鞣质部位提取纯化工艺,制备藏药余甘子总鞣质部位,总鞣质含量54.17%,没食子酸、柯里拉京、鞣花酸的质量分数分别为:4.54%、1.61%、3.67%。2余甘子鞣质部位人肠内菌代谢研究采用人肠内菌与余甘子鞣质部位在厌氧条件下,37℃共温孵培养的方法进行代谢,HPLC-MSn法对代谢物进行定性,HPLC-UV法进行定量。余甘子鞣质部位在人肠内菌作用下生成9个代谢产物,其中4个为焦性没食子酸、甲基没食子酸、尿石素B和尿石素A。3个原型成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸的含量随人肠内菌代谢时间延长呈先增加后减少的趋势。在离体条件下藏药余甘子鞣质部位可被人肠内菌代谢,为进一步研究余甘子鞣质部位的代谢途径奠定基础。3余甘子鞣质部位对肝酶活性的影响研究建立同时评价6种CYP450不同亚型酶活性的“Cocktail”探针药物大鼠肝微粒体体外代谢模型,并用该方法研究余甘子鞣质部位对CYP450各亚型酶活性的影响。HPLC获取各探针底物代谢产物的峰面积和内标化合物的峰面积,计算出代谢产物与内标化合物的峰面积之比值。以未加阳性抑制剂和受试鞣质部位的空白对照的活性为100%,分别计算加入阳性抑制剂或鞣质部位后的相应活性。采用Graphpad prism 5.0软件进行非线性回归分析,计算各阳性抑制剂和鞣质部位对各亚型酶的半数抑制浓度IC50值。结果,阳性抑制剂的半数抑制浓度IC50值均小于1μmol.L-1,说明其对CYP450各亚型酶活性具有强烈的抑制作用,余甘子鞣质部位的半数抑制浓度IC50值均大于50μg.mL-1,说明余甘子鞣质部位对CYP450各亚型酶活性影响很小,临床用药的时候发生药物相互作用的可能性较低。4余甘子肝微粒体代谢研究建立体外肝微粒体温孵模型,对余甘子鞣质部位、指标性成分没食子酸、柯里拉京进行体外代谢研究,体外温孵30 min后,处理样品并采用HPLC-MSn法对代谢物进行定性,结果鞣质部位和没食子酸在肝微粒体代谢30min后,并未发现新的代谢产物,柯里拉京在温孵后检测到没食子酸跟鞣花酸两个成分。