贝氏莫尼茨绦虫幼节和成节间差异基因的EST研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zkry123
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贝氏莫尼茨绦虫由头节、颈节和体节三部分组成,其在形态上有一系列的变化规律。绦虫成虫在形态学上的这些变化,本质上都是基因在时间或空间上选择性表达,即基因差异表达的结果。运用分子生物学实验技术,筛选出控制这些性状的基因,以该绦虫作为模式生物,为研究高等生物器官发育的分子机制奠定基础。1.为了制作结构清晰的贝氏莫尼茨绦虫成虫的染色标本,观察其形态结构,总结其形态变化规律,本实验以新疆绵羊体内寄生的贝氏莫尼茨绦虫为实验材料,用苏木素染色法染色,在光学显微镜下观察了该绦虫的纵排泄管、节间腺、雌雄生殖系统等结构。结果表明,贝氏莫尼茨绦虫纵排泄管从其颈节至孕节都存在,逐渐变粗;生殖系统在幼节出现萌芽,成节中雌雄生殖器官发育成熟,孕节中雄性生殖器官最先退化,尔后卵巢、卵黄腺退化,卵模退化的较慢,可看到节片中有充满虫卵的子宫,同时有卵模存在。2.为了筛选贝氏莫尼茨绦虫幼节和成节之间的差异基因,本实验以新疆绵羊体内寄生的贝氏莫尼茨绦虫为实验材料,根据绦虫标本的形态观察,选取相应绦虫的幼节和成节,应用mRNA差异显示技术(DD-PCR)分析。本实验选用3种锚定引物和8种随机引物,进行差异显示RT-PCR,扩增产物经电泳分析、鉴定并回收差异基因片段,进行二次扩增,用pMD18-T载体将扩增后的片段克隆, Northern blot验证差异基因片段,对差异基因测序并进行Blast分析。结果,筛选得到8个差异的基因片段,其中SeqA、SeqB、SeqC、SeqG是贝氏莫尼茨绦虫成节特异表达的EST,SeqD、SeqE、SeqF、SeqH是贝氏莫尼茨绦虫幼节特异表达的EST,这8个基因都是新基因。SeqE的部分序列与亚洲带绦虫和肥头带绦虫线粒体基因组的部分序列同源性比较高。本论文对贝氏莫尼茨绦虫新基因的筛选、基因全序列及其具体的生物学功能的深入研究奠定了基础。
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