杂交育种是目前国内外常用的育种方式之一。柑橘杂交与其他果树杂交不同,大部分的柑橘品种具有多胚性,所以柑橘育种所用母本大多是以单胚为主,这就造成了柑橘品种遗传背景比较狭窄。利用胚挽救技术可以使合子胚正常生长,获得再生植株,但在杂种胚挽救的同时,也必然存在珠心胚。因此,确定合适的胚挽救时间,快速鉴定杂种后代,减少珠心胚给杂交育种带来的干扰,提高柑橘的育种效率,缩短育种周期具有重要意义。本试验配制了5个杂交组合,早蜜椪柑×南橘、早蜜椪柑×阿弗勒、早蜜椪柑×意波利多、早蜜椪柑×红美人、早蜜椪柑×沃柑。从授粉70 d开始,每隔5 d取一次杂交果实,对各个杂交组合进行胚挽救,确定适宜的胚挽救时间,并通过配制不同萌发培养基来确定最适培养基中蔗糖和GA3浓度,最后利用SSR分子标记技术对杂交后代进行鉴定。本研究取得的主要结果如下:1.幼胚萌发适宜的蔗糖和GA3浓度将授粉后85 d种子幼胚接种到不同浓度的蔗糖和GA3培养基中,以此筛选最适杂种胚挽救的培养基。植物激素以GA3 0.8 mg/L、1.0 mg/L、1.2 mg/L,蔗糖浓度以3%、7%、10%,共配制9种培养基,9种培养基均以MT培养基为基础。结果表明在加入7%的蔗糖上幼胚生长态势良好,适宜用于幼胚培养。2.不同发育时期胚的培养从授粉后70 d开始,分别去授粉后70、75、80、85、90、100 d的杂交果实进行胚挽救。结果显示,父本以南橘、意波利多、阿弗勒、红美人、沃柑的杂交组合通过杂交授粉分别获得杂交果实180、45、100、48、35个,座果率分别为27.52%、14.75%、35.09%、30.00%、14.58%。以南橘为父本的杂交组合,在171个杂交果实中共获得种子865颗,幼胚总数为9052个,平均每颗种子胚数10.5个,经过胚培养共获得3965株杂交后代。以意波利多为父本的杂交组合,在38个杂交果实中共获得杂交种子109颗,幼胚总数为928个,平均每颗种子胚数为8.50个,经过胚培养共获得260株杂交后代。以阿弗勒为父本的杂交组合,在76颗杂交果实中共获得种子394颗,其中幼胚总数为3765个,平均每颗种子胚数9.60个,经过胚培养共获得杂交后代1304株。以红美人为父本的杂交组合,在37颗杂交果实中共获得杂交种子144颗,其中幼胚总数为1248个,平均每颗种子胚数8.7颗,经过胚培养共获得杂交后代313株。以沃柑为父本的杂交组合,在33个杂交果实中共获得杂交种子131颗,其中幼胚总数为1183个,平均每颗种子胚数9.0颗,经过胚培养共获得杂交后代390株。在70-100 d的时间段里,通过体视显微镜观察,在授粉80 d后,同一颗种子中的幼胚形态上已经开始有不同程度的分化,而在授粉70 d后的幼胚还大多都是球形胚,在培养基上难以离体培养,随着幼胚不断发育,不同杂交组合中的幼胚萌发率和成苗率不断增长。父本是阿弗勒的杂交后代在授粉85 d后成苗率达到最高,父本是意波利多的杂交后代在授粉90 d后成苗率达到最高,父本是南橘、红美人和沃柑的杂交后代在授粉100 d后成苗率达到最高。3.杂交后代的分子生物学鉴定提取杂交后代的基因组DNA,从20对引物中筛选多态性引物。结果表明,早蜜椪柑×南橘杂种后代可以用P190引物鉴别,早蜜椪柑×阿弗勒杂种后代可以用P47引物鉴定。利用上述多态性引物进行杂种后代鉴定,从早蜜椪柑×南橘杂交组合中,对3965株杂交后代进行分子标记鉴定,从杂交后代中共鉴定出48株杂种苗,从早蜜椪柑×阿弗勒杂交组合中,对545株杂交后代进行分子标记鉴定,从杂交后代中共鉴定出1株杂种苗。将完成鉴定的4510株杂交后代进行移栽炼苗,通过炼苗,共获得1790株杂交后代,其中,早蜜椪柑×南橘获得1435株杂交后代,早蜜椪柑×阿弗勒获得355株杂交后代。综上所述,早蜜椪柑×南橘杂交组合在授粉100 d后,每颗种子中的幼胚数量最多,成苗率最高,但在授粉100 d后没有鉴定到杂种苗。在授粉80 d后,成苗率相较于100d时虽然有所降低,但在授粉80 d后鉴定到的杂种后代数量最多。早蜜椪柑×阿弗勒在授粉85 d后成苗率达到最高,而在授粉90 d后鉴定到杂种苗,在授粉85 d和90 d这两个时间段里,幼胚数量相差不大。结果表明,父本是南橘的杂交组合适宜的挽救时期是在授粉80 d后,早于80 d时,幼胚难以进行离体培养在父本是阿弗勒的杂交组合适宜的挽救时期是在授粉后90 d,这个时期进行胚挽救,既能够减少胚培养的工作量,也能够减少后期杂种鉴定的工作量。