论文部分内容阅读
目的:比较HBV感染免疫耐受期、免疫清除期患者与健康对照组外周血单个核细胞（PBMCs）c GAS-STING-TBK1-IRF3信号通路关键分子蛋白表达的差异及补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期、免疫清除期患者PBMCs c GAS-STINGTBK1-IRF3信号通路关键分子蛋白及IFN-α、IFN-β表达的影响,进一步阐述补肾解毒法能否恢复HBV感染患者的免疫功能,以期为临床应用补肾解毒法治疗慢性HBV感染患者提供进一步的依据。方法:收集2021年3月-2021年9月于湖南中医药大学第一附属医院肝病科门诊就诊的HBV感染患者20例,其中免疫耐受期患者10例,免疫清除期患者10例,经患者知情同意后采集外周静脉血30ml。此外,收集非HBV感染健康人10例。取10ml外周血,分离PBMCs,Western Blot法分别检测来自HBV感染免疫耐受期、免疫清除期患者、健康人PBMCs c GAS-STING-TBK1-IRF3信号通路关键分子蛋白表达;另20ml外周血分离出PBMCs后分别以同体积补肾解毒血浆、空白血浆干预48h,48h后收集PBMCs分别行Western Blot和ELISA检测组间c GAS、STING、TBK1、IRF3蛋白表达及IFN-α、IFN-β表达水平,使用SPSS26.0进行数据的统计分析。结果:1.HBV感染免疫耐受期、免疫清除期患者与健康人PBMCs c GAS蛋白表达水平分别为0.36±0.09、0.16±0.13、0.36±0.09,HBV感染免疫清除期患者PBMCs c GAS蛋白表达水平较健康人、HBV感染免疫耐受期患者明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）,而免疫耐受期患者PBMCs c GAS蛋白表达水平较健康人无明显差异（P＞0.05）;三组PBMCs STING蛋白表达水平分别为0.39±0.26、0.16±0.12、0.46±0.18,免疫耐受期、清除期患者PBMCs STING蛋白表达水平低于健康人,其中免疫清除期患者PBMCs STING蛋白表达水平较健康人明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;三组PBMCs TBK1蛋白表达水平分别为0.60±0.21、0.34±0.20、0.49±0.17,以HBV感染免疫耐受期患者最高,健康人次之,其中免疫清除期患者PBMCs TBK1蛋白表达水平较免疫耐受期患者明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;三组IRF3蛋白表达水平分别为0.86±0.30、0.45±0.37、0.58±0.40,以HBV感染免疫耐受期患者表达水平最高,健康人次之,其中HBV感染免疫清除期患者PBMCs IRF3蛋白表达水平较免疫耐受期患者明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）。2.经补肾解毒血浆、空白血浆干预后的HBV感染免疫耐受期患者PBMCsc GAS蛋白表达水平分别为0.13±0.11、0.15±0.11,STING蛋白表达水平分别为0.28±0.21、0.28±0.23,TBK1蛋白表达水平分别为0.39±0.24、0.37±0.23,IRF3蛋白表达水平分别为0.11±0.07、0.13±0.10,以上指标组间差异均无统计学意义（P＞0.05）;以上两组PBMCs培养上清IFN-α表达水平分别为72.59±19.43 pg/ml、49.52±14.59pg/ml,IFN-β表达水平分别为1120.85±213.29 pg/ml、684.49±218.74pg/ml,相对空白血浆对照组,补肾解毒干预组IFN-α、IFN-β表达水平更高,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。3.经补肾解毒血浆、空白血浆干预的HBV感染免疫清除期患者PBMCs c GAS蛋白表达水平分别为0.11±0.05、0.17±0.15,STING蛋白表达水平分别为0.26±0.22、0.23±0.16,TBK1蛋白表达水平分别为0.13±0.11、0.13±0.10,IRF3蛋白表达水平分别为0.14±0.12、0.08±0.06,以上指标组间差异均无统计学意义（P＞0.05）;以上两组PBMCs培养上清IFN-α表达水平分别为83.88±11.80pg/ml、56.14±7.73pg/ml,IFN-β表达水平分别为1100.56±193.10pg/ml、860.81±113.27pg/ml,相对空白血浆对照组,补肾解毒干预组IFN-α、IFN-β表达水平更高,组间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:1.慢性HBV感染患者免疫耐受至免疫清除阶段PBMCs c GAS/STING信号通路关键分子蛋白表达水平存在动态下降过程;2.补肾解毒法对HBV感染免疫耐受期/清除期患者PBMCs c GAS、STING、IRF3、TBK1蛋白表达无明显促进作用,但可提高HBV感染免疫耐受期、清除期患者PBMCs I型干扰素表达水平,提示补肾解毒法可能是从其他途径促进I型干扰素的表达,从而进一步改善慢性HBV感染患者的免疫功能。