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目的:对本实验室从疑似犬细小病毒感染的发病犬粪便中分离的病毒进行全面鉴定和分型;完成分离毒株的全基因组测序,分析进化变异情况;研究细胞传代过程中分离毒株生物学特性变化和VP2基因的变异关系,为疫苗的研究提供依据。方法:采用同步培养法接种猫肾细胞(CRFK)增殖病毒,通过PCR试验、HA试验、HI试验、IFA试验、电镜观察、动物回归试验和VP2基因测序分析进行病毒的鉴定和分型;通过对分离毒株全基因组测序,并利用DNAstar软件和Web server Uses Mfold(Version 3.2)软件分析本毒株和细胞多次传代获得的CPV-N株基因组的一级结构和二级结构,研究分离毒株的变异情况。将病毒在CRFK细胞上连续传代,对发生典型特征变化的代次进行VP2基因扩增和测序分析,推测VP2氨基酸残基的非同义置换和病毒相关生物学特性改变的关系。结果:经鉴定本实验室分离的病毒为犬细小病毒强毒株,命名为CPV-DD株。对分离毒株进行PCR扩增,可扩增出特异性DNA片段(1163bp);盲传至第3代时,HA效价为1:8,其血凝性能被特异性抗体抑制;IFA可见特异性亮绿色荧光,TCID50为103.0/0.1mL;电镜观察可见20nm左右的病毒颗粒,动物回归试验表明CPV-DD株F3对犬的致死率为100%,在CRFK细胞传至第18代时,失去对犬的致病力。病毒VP2蛋白序列分析显示该毒株为CPV-2a型,其氨基酸序列在324位出现Try→Ile替换,处于VP2蛋白的潜在抗原表位。病毒的全基因组测序结果显示CPV-DD株F3 3’-UTR仅有一个重复序列,而F18和CPV-N株均有3个重复序列。CPV-DD株F18和CPV-N株的3’-UTR和VP1基因5’端的二级结构较为相似,而CPV-DD株F3和前两者有较大差异。推测CPV-DD株在细胞传代过程中发生的这种改变可能与病毒适应细胞有关。CPV-DD株在CRFK细胞上共传至第33代,对发生典型生物学特征变化代次的VP2基因进行测序分析,其同源性高于97%,从F7代开始VP2氨基酸序列出现87L→M,101T→I,219I→V,297A→S,300G→A,305Y→D点突变,推测上述氨基酸位点的变异可能与细胞适应性、致病力和HA效价改变有关,这一推论有待进一步试验证实。