目的:男性不育发病率随不育症发病率增加而逐渐增加,男性不育的重要原因是精子的生成及功能问题,影响精子生成的基因多态性研究成为热点,高分辨率溶解曲线分析(High resolution melting analysis,HRM)作为一种实用便捷且准确率高的的基因分型分子技术受到越来越多的关注,本课题拟使用HRM技术针对内蒙古地区不育男性卵泡刺激素受体(Follicle Stimulating Hormone Receptor,FSHR)上的c.919A>G(rs6165)、c.2039A>G(rs6166)基因位点基因多态进行研究,探究男性不育与FSHR基因多态间的关系。材料与方法1.材料收集自2017年11月-2019年11月期间于内蒙古医科大学附属医院生殖中心就诊的男性不育患者血样176例及因女性不孕症就诊的正常男性血样80例。经常规查体、病史询问、精液检查及染色体检查。排除梗阻性无精、精索静脉曲张、腮腺炎及染色体异常患者。实验中所有的受试者均无亲缘关系,年龄于25-35岁间,否认放射史及毒害物质接触史。根据精液质量分为少精、弱精、无精及正常四组。患者空腹采集静脉血,乙二胺四乙酸抗凝剂,在冰箱中以-80℃长时间储存。2.方法DNA提取及PCR扩增:全血DNA提取及检测采用核酸试剂盒(上海百傲科技股份有限公司)提取全血基因组DNA。采用紫外线分光光度仪测定DNA纯度,OD260测定DNA的浓度,最终获得样本浓度均在30-100ng/ml间,OD260/280:1.60-1.85间,符合常规PCR操作要求。将提取的DNA样品在-80℃下冻存,无重复的冻融循环,直到进行检测。高分辨率溶解曲线检测FSHR多态性基因型:根据参考文献设计引物合成,引物合成均由生物公司完成。扩增样本送公司测序,建立HRM反应体系,对扩增样本进行HRM实验,结果与测序结果完全相符,使用已建立HRM反应体系对后续样本进行实验。实验结果使用SPSS统计软件及SHEsis在线软件进行分析。结果1.对预实验样本及20例不育患者c.919A>G(rs6165)、c.2039A>G(rs6166)两位点进行HRM溶解曲线鉴定,计算机分析软件成功将其分离成为不同的曲线。常规实验结果中各分型Tm值及曲线表现差异明显,对于各基因型区分效果良好,176例病例及80例对照全部成功完成检测。2.20例HRM预实验标本及编号1-20的实验标本的测序后结果中显示919和2039均存在GG、AA、GA三种基因型,且与相同样本的HRM实验检测结果相符率为100%。3.FSHR c.919A>G(rs6165)、c.2039A>G(rs6166)位点等位基因频率在实验组与对照组间构成无统计学差异,AA、AG、GG三种基因型构成在各实验组中无统计学差异,各单倍体在各组间无差异。4.FSHR c.919A>G(rs6165)、c.2039A>G(rs6166)位点等位基因频率符合HW平衡,各基因型在实验组与对照组间均存在连锁不平衡。结论:1.本实验结果发现:919A>G(rs6165)、2039A>G(rs6166)两位点基因多态性在少精子、弱精子、无精子各组之间与正常对照组之间无统计差异。919A>G(rs6165)、2039A>G(rs6166)两位点基因多态性与男性不育症无明显关系。2.本实验成功构建FSHR 919和2039的PCR-HRM反应体系,发现HRM是一种可靠的基因型检测手段,可应用于FSHR的基因多态性检测。