克氏原螯虾(Procambarus clarkii)简称小龙虾,是我国重要的经济虾类,广泛分布于我国东南部和中部地区。近年来,随着人们需求的不断上升,养殖业的不断发展,养殖过程中的病害也不断爆发,包括细菌病、病毒病等,给克氏原螯虾养殖业带来了巨大的经济损失。克氏原螯虾作为无脊椎动物缺乏适应性免疫系统,主要通过先天免疫系统来对抗病原体的入侵。抗菌肽(Antimicrobial peptide,AMP)作为无脊椎动物先天免疫系统中的重要效应分子,因其具有广谱的抗菌活性和不易产生耐药性等优点使其成为传统抗生素的替代者之一。甲壳素(Crustin)是目前克氏原螯虾中研究比较广泛的一类抗菌肽,本研究扩增鉴定了来自克氏原螯虾中的一种新型Crustin,命名为Pc-Cru L(Procambarus clarkii crustin L)。为揭示Pc-Cru L在克氏原螯虾中的功能,利用体外重组表达的方式,确定了其抗菌活性。以期从天然免疫的角度揭示其与病原体的关系,并为克氏原螯虾养殖病害的防控和药物的开放发提供一定的科学依据。主要内容如下:在克氏原螯虾中扩增Pc-Cru L基因,将该基因连接至p GEX-4T-1载体,构建原核表达质粒,将重组质粒在感受态BL21(DE3)中诱导表达纯化,进行体外和体内抗菌实验。Pc-Cru L的CDS区包含330bp,编码109个氨基酸。Pc-Cru L在正常克氏原螯虾的各组织中均有表达,在血淋巴中表达水平较高,而在肝胰腺中表达水平相对较低。体外抑菌结果表明,Pc-Cru L蛋白明显抑制了副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌的生长,具有广谱的抑菌活性。通过注射外源重组的Pc-Cru L蛋白可提高克氏原螯虾感染副溶血弧菌的存活率。总体而言,Pc-Cru L是克氏原螯虾中重要的免疫分子,在防御克氏原螯虾的细菌感染中起着至关重要的作用。