研究背景:人乳头瘤病毒（Humanpapillomavirus,HPV）的反复持续感染是导致宫颈癌的主要原因。HPV的基因根据功能可分为早期基因区和晚期基因区,二者分别编码6个早期蛋白（E1、E2、E4、E5、E6、E7）和2个晚期蛋白（L1、L2）。作为异源性蛋白,这些分子成为了疫苗研发的重要靶点,以L1和/或L2为靶点的预防性疫苗已经应用于临床,并有效地降低了年轻女性感染HPV的风险,但是一些经济不发达地区女性的疫苗接种率普遍较低,而且预防性疫苗对已感染HPV的患者无效,因此研发HPV治疗性疫苗至关重要。HPV感染宿主细胞后,HPV基因与人体基因组整合,其中HPV晚期基因可能发生丢失,例如L1、L2,但是早期基因E6、E7则在细胞癌变的过程中持续发挥重要作用。研究发现HPV E7比E6具有更好的免疫原性,因此研发特异性针对E7抗原的疫苗成为了一种潜在的治疗策略,但是由于E7蛋白的免疫原性仍相对较低并且具有致癌活性,导致相关研究进展缓慢。近年来随着对E7蛋白结构及功能的进一步认识,一些无致癌活性的E7突变体被发现,这些突变体为治疗性疫苗的研发提供了可能。5型腺病毒在多种疫苗中作为载体使用,其安全性和有效性均已被证实。作为一种双链DNA病毒,5型腺病毒类似于疫苗佐剂,可以高效激活人体免疫系统的识别。最近研究发现在癌细胞表面高表达的程序性死亡受体的配体1（Programmed Death-ligand 1,PD-L1）与活化T淋巴细胞表面的免疫检查点分子一程序性死亡受体1（Programmed Death-1,PD-1）结合后,可导致相关的T淋巴细胞发生凋亡,最终使肿瘤细胞逃脱免疫监视,而PD-1/PD-L1抗体/阻断剂可以有效抑制他们之间的信号传导,维持T淋巴细胞的活化状态进而杀伤肿瘤细胞,并且在多种癌症的治疗中取得了良好的效果。综上所述,研发一种既可高效表达无致癌活性的E7治疗性疫苗来激活人体的免疫系统,同时又有效抑制肿瘤的免疫逃逸成为治疗宫颈癌的有效策略。研究目的:探究表达E7突变体的缺陷性腺病毒疫苗联合PD-1/PD-L1抗体对小鼠宫颈癌肿瘤模型的治疗作用。实验方法:通过构建TC-1小鼠皮下宫颈癌肿瘤模型,以无致癌活性的E7腺病毒作为治疗性疫苗并联合应用PD-1/PD-L1抗体,观察小鼠TC-1肿瘤的生长情况,通过检测脾脏以及肿瘤组织中浸润的相关淋巴细胞比例来评估疫苗及PD-1/PD-L1抗体对免疫系统的影响,通过检测肿瘤中相关细胞因子以及肿瘤组织的组织学变化来评估疫苗及抗体对肿瘤侵袭和转移的影响。实验结论:构建的表达突变E7（delD21-C24）的缺陷性腺病毒疫苗可以有效抑制小鼠肿瘤的生长,提高CD8+T细胞的比例,抑制肿瘤的增殖和侵袭,但不能抑制小鼠体内调节性T细胞（Regulatory T,Treg）和髓源性抑制细胞（Myeloid-derived suppressor cell,MDSC）的产生。而E7疫苗联合PD-1/PD-L1抗体对肿瘤生长的抑制作用进一步加强,甚至导致肿瘤的完全消退,同时也诱发小鼠体内产生更多的CD8+T淋巴细胞,并且显著降低了小鼠体内免疫抑制性细胞的比例。综上所述,我们构建的Ad-E7治疗性疫苗可以有效抑制小鼠肿瘤的生长,并且当联合PD-1/PD-L1抗体作用时抑制作用更加显著。