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目的:探讨铁过载能否通过激动IL-11信号促进肾衰小鼠的心肌纤维化。方法:1.体内实验:将C57小鼠随机分成5组,每组15只:假手术组(Sham)、手术组(CRF)、铁过载组(CRF+Fe)、IL-11抑制组(CRF+Fe+AAV9-Mi R-IL11)和IL-11激动组(CRF+Fe+AAV9-Mi R-IL11+rm IL-11)。本研究采用左肾2/3切除术,一周后结扎右侧肾蒂后切除肾脏(5/6肾大部切除术)制备小鼠慢性肾衰模型。术后8周HE染色观察肾脏损伤情况,肌酐、尿素检测试剂盒检测血清肌酐、尿素水平。肾衰模型小鼠通过腹腔注射右旋糖酐铁为铁过载组。在铁过载组的基础上在行5/6肾大部切除术前14d尾静脉注射IL-11敲减腺相关病毒为IL-11抑制组,一部分注射IL-11敲减腺相关病毒的小鼠再皮下注射外源性的rm IL-11为IL-11激动组。将构建的各组小鼠取得血液和组织标本后,采用HE染色观察心肌损伤情况,利用Masson染色观察胶原纤维面积,普鲁士蓝染色观察铁沉积,荧光探针DHE用来检测小鼠心肌组织中ROS水平,MDA、SOD试剂盒检测血清中氧化应激水平,免疫荧光、Western Blot等检查方法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)等纤维化相关蛋白的表达情况,及其与IL-11的相关性。2.体外实验:体外培养心肌成纤维细胞,加入右旋糖酐铁构建铁过载模型,用IL-11 si RNA和外源性加入rm IL-11干预心肌成纤维细胞IL-11信号,实验共分4组:对照组(sham)、铁过载组(铁剂)、IL-11抑制组(铁剂+si IL-11)、IL-11激动组(铁剂+si IL-11+rm IL-11)。用Western Blot、免疫荧光检测各组大鼠心肌组织中α-SMA、vimentin观察心肌成纤维细胞的转分化,通过Edu-555细胞增殖、细胞划痕实验评估IL-11对心肌成纤维细胞增殖能力和迁移能力的影响,荧光探针DCFH-DA用来检测小鼠心肌成纤维细胞中ROS水平。结果:1.5/6肾大部切除术的CRF模型小鼠在手术后8周,出现显著肾功能损害等改变,手术后小鼠血肌酐(P<0.01)、尿素(P<0.0001)均明显高于假手术组。组织病理学上可见假手术组小鼠肾脏大小、颜色、形态均正常,手术组小鼠的残余肾脏体积增大、颜色变浅,呈“大白肾”,且手术组部分小鼠出现肾组织包膜积水、充血现象,肾脏HE染色较假手术组出现了肾小球数量减少肾小球硬化,肾小管代偿性扩张。2.心脏HE染色可见假手术组心肌排列整齐、均匀,手术组心肌组织排列稍欠整齐,铁过载组心肌排列明显不齐、可见心肌组织断裂。心脏普鲁士蓝染色结果示,假手术组与手术组均未见明显铁沉积,铁过载组心肌组织中可见铁沉积。3.Western Blot结果显示,手术组与假手术组相比,α-SMA、vimentin、IL-11蛋白表达差异均没有显著性(P>0.05)。铁过载组较手术组α-SMA、vimentin、IL-11蛋白均明显升高(P<0.05),IL-11抑制组较铁过载组表达减少(P<0.05),而IL-11激动素较IL-11抑制组表达增多(P<0.05)。免疫荧光染色定量分析α-SMA、vimentin结果与Western Blot结果基本符合。4.Masson染色结果示,假手术组及手术组细胞间仅有少量蓝色胶原纤维,而铁过载组细胞间可见大量蓝色胶原纤维,IL-11抑制组较铁过载组明显减少,而IL-11激动组较抑制组明显增多。5.检测小鼠心肌组织中ROS水平,结果显示铁过载组较手术组小鼠心肌组织显示出强烈的红色荧光(P<0.05),而IL-11抑制组可见ROS生成减少(P<0.05)。重新加入外源性rm IL-11,ROS表达再次增多(P<0.05)。6.体外培养的心肌成纤维细胞,Western Blot结果显示,当rm IL-11浓度达10μM,α-SMA、vimentin表达量较对照组明显升高(P<0.05)。其中铁过载组较对照组α-SMA、vimentin、IL-11蛋白均升高(P<0.05),IL-11抑制组较铁过载组表达减少(P<0.05),而IL-11激动素较IL-11抑制组表达增多(P<0.05)。7.Edu-555细胞增殖实验结果显示,铁过载组较对照组而言,心肌成纤维细胞增殖能力明显增强(P<0.001),IL-11抑制组细胞增殖能力明显减弱(P<0.0001),IL-11激动组较IL-11抑制组明显增强(P<0.001)。8.细胞划痕实验结果表明,IL-11抑制组中心肌成纤维细胞的划痕愈合率低于铁过载组(P<0.01),IL-11激动组的划痕愈合率明显高于IL-11抑制组(P<0.001)。因加铁后培养皿中部分细胞死亡,所以铁过载组、IL-11抑制和激动组因加铁细胞数量较对照组减少,无法与对照组比较。9.检测细胞ROS水平,结果铁过载组较对照组小鼠心肌组织显示出强烈的红色荧光(P<0.05),而IL-11抑制组ROS生成减少(P<0.05),IL-11激动组较IL-11抑制组表达增多(P<0.05)。结论:1.铁过载可以通过激动IL-11信号促进肾衰小鼠的心肌纤维化。2.铁过载通过激动IL-11信号促进心肌成纤维细胞增殖、迁移及向肌成纤维细胞转分化。