【摘 要】
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目的:研究慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)继发小鼠颌骨异常的形态学变化,以及探究CKD小鼠颌骨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)和股骨骨髓巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)的细胞学变化,为深入探究肾性颌骨疾病的机制奠定一定的基础。方法:1.运用0.2%腺嘌呤饮食法建立CKD小鼠模型,并定期监测小
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目的:研究慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)继发小鼠颌骨异常的形态学变化,以及探究CKD小鼠颌骨间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)和股骨骨髓巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)的细胞学变化,为深入探究肾性颌骨疾病的机制奠定一定的基础。方法:1.运用0.2%腺嘌呤饮食法建立CKD小鼠模型,并定期监测小鼠体重。造模后,每4周监测血清生化指标:血清尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、钙(Ca)和磷(P)的变化。2.造模后的12周末处死小鼠,行肾脏组织HE染色。对造模12周末收集的血清进行ELISA检测,测定血清内甲状旁腺激素(PTH)含量。3.取小鼠右侧下颌骨和股骨行Micro-CT观察,主要测量指标有骨体积分数(BV/TV,BVF)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁分离度(Tb.Sp)、骨矿化密度(BMD)和骨皮质厚度。扫描后行骨组织HE染色。4.取小鼠颌骨MSCs和股骨BMMs,体外培养颌骨MSCs检测其增殖能力和成骨向分化能力。同时体外培养诱导股骨BMMs成破骨细胞观察其破骨分化能力。结果:1.成功建立慢性肾脏病小鼠模型,与正常对照组相比,CKD组的小鼠进食量减少,毛量减少,缺乏光泽,尿量增多,体重随着疾病进展而减轻(P<0.05)。血清生化指标显示:血清BUN、CREA、P水平显著升高(P<0.05),Ca水平轻度升高(P<0.05)。肾脏组织肉眼观变白,体积变小,可见表面粗糙呈明显的颗粒样改变;肾脏组织HE染色示肾小球数目减少,肾间质炎性细胞浸润和纤维化。2.慢性肾脏病对颌骨影响的Micro-CT分析显示,与正常对照组相比,CKD组的下颌骨第一磨牙根分叉处的骨量减少,BMD显著降低,Tb.Th降低,Tb.Sp升高(P<0.05),但Tb.N未发生明显改变;CKD同样导致股骨的骨量和BMD明显下降(P<0.05);组织学HE染色显示,CKD组小鼠的下颌骨骨髓腔内类骨质增加,板层状骨形态改变,形成不规则的骨小梁形态,与CKD组小鼠的股骨骨髓腔内形态不规则的骨小梁增多相类似。ELISA检测显示,CKD组血清PTH含量明显升高(P<0.05)。3.细胞学实验显示,与正常对照组相比,CKD组颌骨MSCs增殖能力增强,7天碱性磷酸酶(ALP)染色显示MSCs早期成骨分化能力增强(P<0.05),21天茜素红染色显示成骨细胞晚期形成矿化结节的能力有所下降(P<0.05);TRAP染色提示CKD组的破骨细胞分化能力更强(P<0.05)。结论:1.腺嘌呤饮食法可以成功诱导慢性肾脏病小鼠模型,钙磷代谢的异常,继发血清PTH水平的升高,模拟了临床上CKD的发展过程。2.CKD可致颌骨的MSCs高增殖,但诱导MSCs成骨后晚期出现一定程度的成骨矿化障碍,同时破骨前体细胞破骨分化能力增强,提示该模型所致的肾性骨病的骨量丢失加快。3.CKD可致颌骨的骨量下降,骨微结构改变,骨代谢指标PTH的异常升高,这些提示口腔临床应全面收集全身系统病史,必须慎重制定口腔治疗计划和执行口腔正畸诊疗。
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