【摘 要】
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目的:检测NR4A1在正常人群、不明原因复发性流产人群的流产绒毛组织中的表达水平。通过观察人绒毛膜滋养细胞（HTR-8/SVneo）的生物学功能变化,探索环孢素（Cs A）促进HTR-8/SVneo细胞增殖与侵袭的可能发生机制。方法:选择2021年1月~2021年10月于安徽医科大学第一附属医院妇产科人工流产手术室行人工流产的患者32例,其中包括因社会性因素自愿行人工流产的16名健康女性为健康对照
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目的:检测NR4A1在正常人群、不明原因复发性流产人群的流产绒毛组织中的表达水平。通过观察人绒毛膜滋养细胞（HTR-8/SVneo）的生物学功能变化,探索环孢素（Cs A）促进HTR-8/SVneo细胞增殖与侵袭的可能发生机制。方法:选择2021年1月~2021年10月于安徽医科大学第一附属医院妇产科人工流产手术室行人工流产的患者32例,其中包括因社会性因素自愿行人工流产的16名健康女性为健康对照组（HCs组）,16名不明原因复发性流产患者为实验组（URSA组）。收集两组患者的绒毛组织,通过苏木精-伊红染色法（HE）观察两组患者绒毛组织的病理形态。通过免疫组织化学染色检测NR4A1的表达定位,蛋白质印迹法（Western blot）检测两组患者绒毛组织中NR4A1的表达差异。选择人绒毛膜外滋养细胞系（HTR-8/SVneo）建立体外细胞模型进行功能实验验证。应用Western blot检测细胞培养24,48,72小时后,不同浓度环孢素（0,0.01,0.1,1,10μM）培养条件下NR4A1的表达水平,并筛选最佳浓度进行后续试验。构建干扰NR4A1及其空载体的HTR-8/SVneo稳定转染细胞株。应用Western blot及q-PCR实验验证干扰NR4A1稳转株的干扰效率,并筛选干扰效率最高组进行后续试验。使用CCK-8试剂盒及Transwell实验分别检测HTR-8/SVneo细胞空载对照组,干扰NR4A1组,干扰NR4A1细胞加环孢素组培养24,48,72小时条件下细胞的增殖与侵袭情况。结果:（1）HCs组和URSA组患者在年龄、身体质量指数（BMI）、产次、停经时间上无统计学差异（p＞0.05）。（2）与HCs组相比,URSA组的绒毛组织经HE染色可观察到滋养细胞数量减少,部分细胞呈现核固缩现象,凋亡数量增加。（3）HCs组和URSA组患者中NR4A1在细胞滋养层细胞（CTB）与合体滋养层细胞（STB）的细胞核内均有表达,以CTB为主。Western blot检测URSA组绒毛NR4A1的表达量低于HCs组,差异有统计学意义（p＜0.05）。（4）Western blot结果显示,加入Cs A后HTR-8/SVneo细胞NR4A1的表达量升高,在1μM时,NR4A1表达量达到最高,10μM时出现抑制,差异有统计学意义（p＜0.05）。（5）成功构建3株HTR-8/SVneo细胞干扰NR4A1稳转株及1株空载体,其中sh-NR4A1-#1的干扰效率最高,差异有统计学意义（p＜0.05）。（6）CCK-8结果显示,干扰NR4A1的稳转HTR-8/SVneo细胞在450nm处吸光度降低,差异有统计学意义（p＜0.05）;Transwell实验结果显示,干扰NR4A1的稳转HTR-8/SVneo细胞穿过小室细胞数减少,加入1μM Cs A培养能够显著逆转这两种趋势。结论:（1）与健康对照组相比,NR4A1在不明原因复发性流产的患者的绒毛组织中表达下调。（2）在HTR-8/SVneo细胞中干扰NR4A1可以导致细胞的增殖与侵袭能力下降。（3）环孢素可以促进NR4A1的表达,从而增强HTR-8/SVneo细胞的增殖与侵袭能力。
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