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背景:瞬时受体电位M7型离子通道(TRPM7)是一种同时拥有阳离子通透活性和激酶活性的双功能离子通道蛋白。TRPM7在多种细胞的病理生理过程中发挥重要作用,如血管平滑肌细胞、神经胶质瘤细胞和星形胶质细胞等。然而,TRPM7通道蛋白是否通过调节血管紧张素ⅡI(Ang ⅡI)诱导的心脏成纤维细胞(CFs)功能改变进而介导心脏纤维化(CF)的发生发展,目前仍不是很清楚。目的:旨在探讨TRPM7离子蛋白通道在Ang ⅡI诱导的CFs功能改变及CF发生发展中的作用。方法:利用酶化学消化法分离、培养SD大鼠的CFs,并进行传代培养,光学显微镜下观察不同时期细胞的生长情况和形态。比较腺病毒载体和慢病毒载体对CFs的转染效率,摸索腺病毒载体转染CFs的最佳感染复数(MOI),构建携带TRPM7-siRNA的腺病载体,并将携带绿色荧光蛋白(GFP)和TRPM7-siRNA的腺病毒载体转染至SD大鼠CFs,转染48小时后荧光显微镜下观察CFs形态和绿色荧光蛋白的表达情况,RT-PCR和Western blot法检测TRPM7-siRNA对CFs上TRPM7的基因沉默效率。首先,用lumol/L的Ang Ⅱ处理CFs至不同时间点(0 h、6 h、12 h、24 h、48 h),Western blot 检测上述不同时间点 CFs 上 TRPM7蛋白表达水平,探索1umol/L的Ang Ⅱ干预CFs的最佳时间点;然后,用1umol/L的Ang Ⅱ分别处理转染GFP和TRPM7-siRNA腺病毒载体的CFs至24小时,全细胞膜片钳法检测各组CFs上TRPM7电流幅度大小,CCK-8法检测CFs增殖能力,免疫荧光法检测CFs分化能力,Western blot分别检测CFs上Ki67、PCNA、αSMA、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ 的蛋白表达水平、RT-PCR 检测 CFs 上 Collagen Ⅰ和 Collagen Ⅲ 的 mRNA 水平。结果:顺利完成CFs的分离、体外原代及传代培养。体外培养的CFs生长状态良好,呈长梭状生长,随着传代次数增多CFs胞体变得扁平,且伸出伪足。经比较发现,相同MOI值时腺病毒载体对CFs转染效率明显高于慢病毒载体,确定腺病毒转染CFs的最佳MOI值为50(MOI=50)。接着,成功构建腺病毒载体 pHBAd-U6-GFP-TRPM7-siRNA(Ad-TRPM7-siRNA),以 Ad-GFP 为对照病毒组,以MOI=50转染CFs至48小时后,RT-PCR和Western blot检测显示TRPM7的表达明显低于对照病毒组。Ang Ⅱ刺激CFs能够时间依赖性地引起TRPM7蛋白表达增多、TRPM7电流幅度增强、CFs增殖、分化能力增强及胶原蛋白合成增多,用Ad-TRPM7-siRNA下调CFs上TRPM7的表达则明显抑制Ang Ⅱ诱导的CFs增殖、分化及胶原蛋白合成能力。结论:TRPM7离子蛋白通道通过调节Ang Ⅱ诱导的CFs功能改变参与心脏纤维化过程。因此,TRPM7有望成为治疗心脏纤维化相关疾病的新靶点。