乙肝病毒表面抗原(Hepatitis B Virus surface antigen，HBsAg)是乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus，HBV)重要的结构蛋白之一，能诱导机体产生保护性免疫应答，在HBV与宿主相互作用过程中发挥重要作用。S基因变异会导致HBsAg的抗原性和免疫原性发生改变，从而突破机体已经形成的免疫防护体系造成新的HBV感染。本实验室前期通过Western blot、免疫荧光、Southern blot、DNA免疫等一系列实验对sK122I、sT123N、sA159G、sK160N、sA159G/K160N等临床产生的免疫逃逸突变进行了研究，结果发现sT123N、sK160N变异会导致HBsAg出现双糖基化，并影响病毒粒子的包装和分泌，sK122I、sA159G、sA159G/K160N突变削弱HBsAg的抗原性，并导致其诱导抗体产生的能力降低，但是尚不清楚携带这些变异的HBV毒株在体内的生物学特性。根据体外的研究发现，我们推测这些变异可能会影响HBV在体内的复制以及病毒粒子的包装和分泌。本研究制药内容包括：　　 第一章的综述部分首先简要介绍了HBV及HBsAg的相关知识;其次详细介绍了S基因变异的研究进展，主要阐述了S基因变异产生的原因、变异的类型，以及变异所产生的主要影响;接下来介绍了HBV的细胞模型和动物模型的研究进展等;最后结合对研究进展的分析提出了本论文的研究目的和意义。　　 第二章中我们对本室前期构建的以pAAV为载体的带有这些点突变的HBV的1.3倍体复制性质粒，进行体外功能的验证。结果发现我们所构建的质粒在体外可能进行正常的蛋白质表达、分泌和复制，这表明质粒构建成功，可以进一步用于体内的研究。另外我们还发现K122I突变型中，L、M、S三种形式表面蛋白的表达均检测不到，可能与抗体不能识别K122I突变的HBsAg有关;T123N突变导致病毒粒子分泌降低，这些结果与本室之前的研究结果一致。　　 第三章首先用尾静脉高压水注射的方法建立了慢性HBV感染的小鼠模型，发现以pAAV为载体的HBV复制性质粒，无论是野生型还是突变型均能在肝组织内进行正常复制，并产生病毒粒子，分泌到血清中。进一步比较各突变对HBV复制、病毒粒子分泌以及诱导的体液免疫应答等的影响，结果显示在高压水注射后的第5天，T123N突变株的肝内病毒拷贝数明显高于野生株;K122I、T123N突变株在血清中的病毒拷贝数明显高于野生株;在高压水注射后的第7天，K122I、T123N、A159G、K160N等突变株在血清中的病毒拷贝数明显高于野生株;然而比较血清和肝组织的病毒拷贝数发现，T123N突变导致病毒粒子分泌降低。血清HBsAg动力学结果表明，在观察的40天内各突变株HBsAg全部接近阴性;而野生株HBsAg的OD值仍在1.0以上，提示突变株HBsAg的清除速率快于野生株。进一步分析体液免疫应答发现，T123N突变组诱导的anti-HBc产生时间明显早于野生组和其他突变组，产生的抗体水平明显高于野生组，提示T123N突变削弱病毒粒子分泌，导致HBcAg在细胞内异常增多，继而引起anti-HBc水平异常增高。　　 第四章总结了本论文得到的相关结果。本文通过建立含有K122I、T123N、A159G、K160N及A159G/160N等HBsAg突变的慢性HBV感染小鼠模型，探索了各突变对体内HBV生物学特征的影响，研究结果表明，HBsAg的糖基化在其辅助病毒粒子分泌的过程中发挥重要作用，继而影响宿主的抗病毒免疫反应，改变病毒的感染和复制进程。本研究结果还提示，适当的病毒感染量和复制水平是维持HBV慢性感染的重要因素。上述研究结果有助于揭示免疫逃逸突变株在体内的感染和复制进程，为研究免疫逃逸突变株的体内演变规律提供参考。