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小反刍兽疫（PPR）是一种主要感染小反刍动物的急性、烈性传染病，具有高发病率和高死亡率特点。本研究通过RT-PCR方法获得PPRV M基因，分别与原核表达载体pET-32a(+)和pGEX-6P-1连接，构建重组质粒pET-32a-PPRV M和pGEX-6P-1-PPRV M，分别转入E.coli Rosetta感受态细胞诱导表达，SDS-PAGE及可溶性分析结果表明pET-32a-PPRV M和pGEX-6P-1-PPRV M重组蛋白均为包涵体。纯化重组蛋白的Western blot结果表明，2种重组蛋白均具有良好的反应原性。以浓缩的PPRV Nigeria75/1株全病毒蛋白为免疫原，对6-8周龄的雌性BALB/c小鼠进行3次免疫，再以纯化pGEX-6p-1-PPRV M重组蛋白加强免疫。取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合，以纯化pET-32a-PPRV M重组蛋白为包被抗原筛选阳性杂交瘤，经三次亚克隆后得到2F6、2B5、3A4和1B5四株单抗细胞株，亚类鉴定结果表明，2F6株和2B5株为IgG3型，3A4株和1B5株为IgM型。Western blot及间接免疫荧光实验表明，4株单抗均能识别重组PPRV M蛋白，且能与Nigeria75/1病毒株特异性结合。单抗染色体分析及单抗细胞传代分析结果表明，筛选出的单抗细胞能稳定分泌特异性的单克隆抗体。用纯化pET-32a-PPRV M蛋白包被酶标板，以2F6株单抗为竞争抗体，建立监测PPRV血清抗体的竞争ELISA方法。通过优化抗原最佳包被量和单抗上清最佳稀释倍数，确定最佳封闭试剂和羊抗鼠酶标二抗的最佳稀释度、孵育时间及显色时间。用建立的竞争ELISA方法对129份临床羊血清样本检测，其检测结果与标准竞争ELISA试剂盒的符合率为95.56%。应用BepiPred分析PPRV M蛋白潜在的B细胞线性表位，以本实验室构建的pCR2.1T-PPRVM质粒为模板，获得三段截短的M基因，分别与表达载体pET-32a（+）及pGEX-6p-1连接，将阳性重组质粒转入E.coli BL21菌株诱导表达，截短重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定，所构建的重组蛋白均获得高效表达，且均具有良好的反应原性。用纯化的pET-32a-PPRV M重组蛋白包被酶标板，建立监测PPRV血清抗体的间接ELISA方法。通过优化抗原最佳包被量和血清稀释倍数，确定最佳封闭试剂和兔抗羊酶标二抗的最佳稀释浓度、孵育时间和显色时间。用建立的间接ELISA方法对129份临床羊血清样本检测，其结果与法国CIRAD-EMVT提供的标准竞争ELISA试剂盒的符合率为92.14%。