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本文以离子液体[Bmim]C1预处理后的再生纤维素为研究对象,一方面,利用纤维素的再生过程制备薄膜、微球、粉末再生纤维素载体,通过硅烷改性或高碘酸钠改性方法对载体进行改性,赋予载体一定的氨基或醛基等活性基团;另一方面,采用氨基测定的方法考察了硅烷改性载体表面的氨基含量;最后采用共价交联、戊二醛交联及吸附-固定化等固定化酶方法,对再生纤维素载体固定化酶的制备工艺进行了设计与优化,主要研究工作与结论如下:
离子液体预处理对纤维素结构形貌的影响通过FTIR、SEM等测试手段分析了离子液体[Bmim]C1预处理前后微晶纤维素Avicel、Whatman滤纸和定性滤纸的结构形貌变化:FTIR谱图显示,Avicel和定性滤纸的再生纤维素中大量的氢键被破坏,纤维素的结晶度明显下降,同时结晶形态也发生了变化,由排列紧密的结晶态即纤维素Ⅰ型向排列疏松的无定形态即纤维素Ⅱ型转变;SEM谱图从宏观上反映了离子液体再生纤维素结构的变化,微晶纤维素致密的分子形态被破坏,表面纤维状结构不复存在,出现孔洞或颗粒状结构。
[Bmim]C1再生纤维素载体固定化木瓜蛋白酶的研究对NaIO4改性的薄膜、多孔微球和粉末进行了共价交联和戊二醛交联的固定化实验,以BAEE法测定固定化酶活,探讨了载体形貌、结晶类型、初始酶浓度、固定化方法等对固定化酶活的影响;硅烷改性再生纤维素载体的固定化酶研究,对硅烷改性再生Avicel和Whatman的薄膜、微球和粉末进行了吸附和固定化实验研究,以BAEE法测定固定化酶活,实验中探讨了吸附反应后吸除上层酶液、无水乙醇解析剂及载体形状等对固定化酶活的影响,优选出最佳固定化方法为:Avicel改性薄膜吸附反应结束后吸净上层澄清液直接进行固定化反应,其最佳固定化酶活为0.008584u/mg。
离子液体再生纤维素载体固定化酶的工艺优化与稳定性研究对0.4mol/LNaIO4改性[Bmim]Cl再生Whatman多孔微球的最佳固定化条件:0.4mol/LNaIO4、pH7.0、加酶量250mg/g载体、戊二醛浓度2.0%及固定化时间为12h;对硅烷改性[Bmim]C1再生Avicel微球的固定化条件进行分析,实验采用吸附反应后吸净上层澄清液直接固定化的方法,优化出最佳工艺条件:加酶量800mg/g载体、戊二醛浓度15%、吸附时间3h、固定化时间4h及pH7.0,其最佳酶活为0.01222u/mg;固定化酶具有良好的温度稳定性及回收稳定性,90℃保存10min后酶活保留可达82.64%,回用11次后,酶活保留仍达到81.26%以上。