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目的检测Triad1(two RING fingers and DRIL[double RING finger linked]1)在人类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)膝关节滑膜中的表达,分析其与类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(Rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes,RA FLS)凋亡的关系,并探索其参与RA FLS凋亡的可能信号通路。方法1.选取15例RA病人作为实验组,6例胫骨平台骨折病人作为对照组(胫骨平台骨折病人无RA病史,无半月板和交叉韧带损伤史)。2.使用免疫组化、免疫荧光和Western blot方法检测类风湿关节炎病人和胫骨平台骨折病人膝关节滑膜中Triad1的表达情况。3.从接受膝关节置换的RA病人滑膜中分离培养RA FLS,并用阿霉素(Adriamycin,ADR)诱导其凋亡。4.用Western blot方法检测阿霉素刺激RA FLS后,在不同时间点(0h,6h,12h,24h,36h)Triad1、p53以及Cleaved caspase3(C-caspase3)的表达情况。5.分别在RA FLS接受阿霉素刺激0h和24h的情况下,使用细胞荧光检测Triad1与p53、Triad1与C-caspase3在RA FLS中的定位和表达情况。6.转染Triad1 short hairpin RNA(shRNA)下调RA FLS中Triad1的表达。7.用Western blot检测下调RA FLS中Triad1的表达对其凋亡相关蛋白水平的影响,并使用EDU检测对其增殖的影响。8.转染Triad1过表达质粒上调RA FLS中Triad1的表达,然后用阿霉素刺激细胞,并用TUNEL检测过表达Triad1后对其凋亡的影响。9.首先应用Western blot检测p53在Triad1诱导的RA FLS凋亡中的可能作用,即转染Triad1过表达质粒上调RA FLS中Triad1的表达,转染p53-shRNA下调RA FLS中p53的表达,并利用阿霉素诱导RA FLS的凋亡,检测在不同转染情况下细胞中各凋亡相关蛋白的水平。10.最后在方法9的基础上应用流式凋亡分析检测p53在Triad1诱导的RA FLS凋亡中的可能作用。结果(1)Triad1表达于人类风湿关节炎膝关节滑膜组织中。(2)Triad1对RA FLS的增殖起负性调节的作用。(3)Triad1对RA FLS的凋亡起正性调节的作用。(4)Triad1可能通过p53通路诱导RA FLS的凋亡。结论Triad1可能通过p53通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞的凋亡。