本研究为获得乳汁中高效表达人溶菌酶（hLYZ）的转基因山羊，分别以人的α-乳清白蛋白、山羊β-酪蛋白、牛as1-酪蛋白和牛β-乳球蛋白基因为调控区构建了人溶菌酶基因组DNA和cDNA的5种乳腺特异表达框架（pAAlyzc、pBClyzc、pINSlyz、pBClyzg、pBLGlyz）。通过与pLNK共转染或独立转染的方式将此5种表达构件转染入山羊胎儿成纤维细胞内。经PCR和Southern-blot检测，从分隔良好的G418抗性克隆中筛选出了整合有这些构件的单克隆细胞。以转基因整合的细胞株为供核细胞，进行山羊体细胞克隆。共计投入489头山羊，最终获得了22只成活的克隆山羊，分别为pAAlyzc4只、pBClyzc4只、pINSlyz3只、pBClyzg6只、pBLGlyz6只。整合鉴定表明，pAAlyzc的4只山羊和pINSlyz3只山羊均不携带外源基因，其他克隆山羊均包含有预期的外源基因。通过人工诱导泌乳的乳中hLYZ表达分析表明：整合有pBLGlyz基因的克隆山羊在乳汁中高效表达了人溶菌酶，其中BLGl和BLG2的表达水平分别为3g/L和4g/L。自然泌乳后，乳汁中仍然可维持人溶菌酶的高效表达。经SP-Serphrose离子交换层析和超滤相结合纯化了转基因山羊乳汁中的人溶菌酶，纯度达98％以上。溶壁微球菌溶解实验测定该溶菌酶的比活与天然人的溶菌酶活性相当，为1.4-1.6×10<5>IU/mg。重组人溶菌酶的性质鉴定表明：N-端10个氨基酸测序与天然人的溶菌酶完全一致；具有很好的热稳定性和pH稳定性；具有广谱的革兰氏阳性菌抗菌活性，1mg/ml时对测定的40株临床分离菌的抑制率均在90％以上。 以上结果表明：该研究首次获得了乳汁中可表达克级水平的人溶菌酶转基因山羊；重组人溶菌酶能够在转基因山羊乳腺中进行持续、高效的表达且不对受体山羊的生理功能产生不良影响。转基因山羊乳腺中表达的人溶菌酶具有同天然人乳溶菌酶相近的理化性质和生物学活性，可供大规模商业化开发。同时也表明体细胞体外遗传修饰结合核移植技术是高效制备转基因家畜的方法，可用以批量生产转基因家畜。