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本实验室已从柏树枝中分离筛选到一株腐生真菌NK-36b，其发酵产物经过TLC法初步鉴定，HPLC定性定量检测，以及质谱和核磁共振谱进一步确定，证明了该菌的发酵产物中含有大量的球毛壳甲素，产量高达83mg/L。实验证明，NK-36b在以杨树叶子为唯一碳源的培养基上生长良好，可以在刚果红培养基上可产生水解圈，这些结果表明该菌同时具有降解纤维素的能力。这些特殊的NK-36b的生物学功能让它在应用领域具有巨大的潜力，所以我们需要通过分子生物学的方法对它进行研究来了解其代谢途径的分子机制。
G蛋白是真核生物中一类很重要的信号蛋白，控制调节着很多代谢通路，如MAPK级联反应和cAMP信号通路，能够将环境中的信号传导到细胞内调控细胞的代谢。G蛋白是由Gα，Gβ，Gγ三个亚基组成的。据文献报道，Gα基因在里氏木霉(Trichoderma reesei)中调节纤维素酶的表达，影响碳源代谢；Gα基因也被报道影响拟枝孢镰刀菌(Fusarium sporotrichioides)和构巢曲霉(Aspergillus nidulans.)中真菌毒素的合成，因此推测Gα基因在NK-36b中对纤维素降解能力和次级代谢产物的合成有影响。通过GenBank比对获得NK-36b的所有Gα亚基序列，文献报道，丝状真菌中Gα1和Gα3基因最为保守，因此选择敲除这两个基因来研究Gα,亚基在NK-36b中的功能。
本论文通过PCR扩增得到Gα1和Gα3基因的同源片段，构建了敲除质粒(pUC-Ga1和pGAPDH-Bar1-Ga)后通过原生质体转化的方法将其导入NK-36b中。利用潮霉素(hyg)和双丙氨磷(bar)选择压力来筛选转化子，通过PCR，Southern b1ot等方法进一步筛选敲除重组子(CHD4)。最后通过RT-PCR检测敲除重组子Gα1基因的表达水平，结果发现CHD4的Gα1基因的表达水平显著下降。在表型方面，利用DNS的方法检测发酵液中的CMCase的酶活含量；并通过HPLC来检测发酵液中球毛壳甲素的产量，结果发现在CHD4中随着Gα1基因表达水平的下降，菌株降解纤维素的能力以及球毛壳甲素的合成能力均显著降低。表明Gα1基因对NK-36b次级代谢产物的合成和纤维素酶的形成起着重要作用。