论文部分内容阅读
1 研究目的以“脾主统血”脏象理论为指导,通过基础实验结合临床试验深入探讨“脾不统血证”与脑-肠轴功能指标相互关系,明确“脾主统血”调控机制和物质基础,借以发展与创新“脾主统血”理论,丰富科学内涵,指导出血病症治疗。2 研究方法2.1文献研究通过联机检索与手工分检两种方式,检索“脑-肠肽进展研究”、“脾不统血”、“脾虚证”文献,加以系统整理与分析,探讨脑-肠肽相关因子生物学特性研究以及脑-肠肽相关因子与“脾不统血”证相关研究,明确“脾主统血”与脑-肠肽内在关系及研究进展,为本研究提供指导价值。2.2基础研究通过免疫造模法(GP-APS)对160只雌雄各半的BALB/c小鼠建立ITP动物模型。造模成功后,从160只小鼠尾静脉取血,按照血小板计数随机分为正常对照组、模型对照组、强的松组、非从脾论治组、健脾益气组、健脾益气摄血组、健脾温阳摄血组、归脾汤组8组,每组20只,造模第8天开始各组均按0.1ml/10g体积药物灌胃干预,每天1次,共8天。观察指标:①止血相关指标:在造模前、造模后2天、造模后8天、造模后12天、造模后15天动态监测小鼠外周血血小板计数和血小板分布宽度、出血程度分级并记录。通过动态监测各组小鼠外周血血象、出血程度分级,评价健脾益气摄血方止血效果,探索“从脾论治”止血机制。②脑-肠肽指标:实验结束后,摘眼球取全血,不抗凝,制备待测血清,以ELISA法检测各组小鼠血清VIP、5-HT、β-EP,探讨不同治则对脑-肠肽功能指标的影响,进一步探索脑-肠轴与脾不统血证的内在关系。2.3临床研究2.3.1健脾益气摄血方对脑-肠肽相关因子影响:采用中央随机对照、多中心临床试验方法,将符合纳入标准的ITP患者通过中央随机分为健脾益气摄血方组、健脾益气摄血方联合强的松组、强的松组三组。健脾益气摄血方组(A组)服用北京康仁堂药业有限公司生产的中药配方颗粒(黄芪、党参、茯苓、白术、阿胶、茜草、炙甘草),每次1袋,每日2次;强的松组(C组)强的松首次剂量按1-1.5mg/(kg·d),早8点顿服,治疗期间有效者可减量。健脾益气摄血方联合强的松组(B组)的健脾益气摄血配方颗粒和强的松用量用法同前。治疗21天统计相关治疗结果。对比各组不同访视点的外周血小板分度评分、出血分度评分及脑-肠肽指标差异,观察益气健脾摄血方对ITP患者血液脑-肠轴功能指标影响,探讨脑-肠肽相关因子与提升患者外周血小板计数、止血疗效的相关性。2.3.2异病同证脑-肠肽相关因子比较:将同时符合免疫性血小板减少症、功能性子宫出血、消化道肿瘤疾病诊断和脾不统血证诊断入选病例标准的患者,进行风险与收益交流,当患者充分知情后,纳入临床试验,同时纳入正常人对照研究。入组当天,采集患者外周血,按ELISA法,检测血清VIP、5-HT、β-EP。通过对异病同证出血性疾病患者脑-肠肽相关因子比较性研究,探讨脾主统血理论的物质基础。3 研究结果3.1文献研究结论基于文献研究,发现脑-肠肽(BGP)是具有激素和神经递质双重作用的重要功能因子,脑-肠轴可通过神经-内分泌网络调控脑-肠肽相关因子刺激胃肠道功能和免疫功能。而脑-肠肽相关因子与脾虚证存在密切关系,当脾气虚时,脑-肠肽相关因子在中枢神经系统和外周的含量会出现上升或下降。通过益气健脾的方法治疗干预后,上述脑-肠肽含量会逐渐恢复到正常水平。3.2基础实验结果3.2.1外周PLT计数结果:①在造模前各组小鼠PLT计数无统计学差异(p>0.05),说明基线齐,各组数据具有可比性。②在ITP造模后第2天、第8天、第12天(给药第4天),各组小鼠PLT计数显著低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。③造模后第15天(给药第7天),与ITP模型对照比较,强的松组、健脾益气组、健脾益气摄血组、健脾温阳摄血组、归脾汤组小鼠PLT计数明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。非从脾论治组小鼠PLT计数略有升高,无统计学意义(P<0.05);强的松组与正常对照组小鼠PLT计数比较,无统计学意义(p>0.05),其他各组与正常对照组比较均有统计学意义(p<0.05)。3.2.2血小板分布宽度结果:血小板分布宽度比较,各组间小鼠PDW在造模前、第2天、第8天、第12天、第15天比较均无统计学差异(p>0.05)。3.2.3出血程度分级结果:造模后各组出血程度分级比较,各组出血程度分级分布无差异(p>0.05),基线齐平,各组具有可比性。给药后第6天,各模型组在药物干预第6天出血程度分级存在差别。各药物干预组与ITP模型对照组进一步统计比较,强的松组、健脾益气组、健脾益气摄血组、健脾温阳摄血组、归脾汤组出血程度分级均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。非从脾论治组与ITP模型对照组比较无统计学差异(p>0.05)。给药后第8天,各模型组出血程度分级分布存在差别。各药物干预组与ITP模型对照组进一步统计比较,强的松组、非从脾论治组、健脾益气组、健脾益气摄血组、健脾温阳摄血组、归脾汤组出血程度分级均降低,差异有统计学意义(P<0.05)。3.2.4脑-肠肽指标结果:β-EP、5-HT、VIP组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05);β-EP比较:与正常对照组比较,ITP模型对照组β-EP含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与ITP模型对照组比较,健脾益气摄血组β-EP含量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。其他各组与ITP模型对照组比较均无统计学差异;5-HT比较:与正常对照组比较,ITP模型对照组5-HT含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与ITP模型对照组比较,强的松组、非从脾论治组、健脾益气组、健脾益气摄血组、健脾温阳摄血组、归脾汤组各组5-HT含量均升高,且差异有统计学意义(P<0.05)。其中强的松组5-HT含量均升高最明显;VIP比较:正常对照组与ITP模型对照组比较,无统计学意义(p>0.05)。与ITP模型对照组比较,强的松组VIP含量明显升高,有统计学意义(P<0.05)。而健脾温阳摄血组VIP含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。其他各组与ITP模型对照组比较无统计学意义。3.3临床研究结果3.3.1健脾益气摄血方对脑肠轴功能指标影响:①外周血小板分度评分值:三组治疗后外周血小板分度评分值组间比较,具有统计学意义(p<0.05)。各组间两两比较,A组与B组比较,具有统计学意义(p<0.05);A组与C组比较,具有统计学意义(p<0.05)。②出血分级评分值:第7天与第1天出血分级评分值比较,A组、B组均具有统计学意义(p<0.05)。第14天、第21天分别与第1天出血分级评分值比较,三组均有统计学意义(p<0.05)。③脑-肠肽指标:治疗前后β-EP测定值比较,A组、B组均有统计学意义(p<0.05)。三组治疗前后VIP测定值比较,有统计学意义(p<0.05);治疗后较治疗前的变化值组间比较,有统计学意义(p<0.05)。其中,A、B两组分别和C组两两比较,有统计学意义(p<0.05)。3.3.2异病同证脑肠轴功能指标比较性:四组组间比较5-HT、VIP、β-EP均有统计学意义(p<0.05)。功血、消化道肿瘤、血小板减少患者5-HT、VIP、β-EP检测值均较正常人下调,但ITP患者5-HT检测值较其他三组显著上调,VIP检测值较正常人明显下调。两两比较,消化道肿瘤患者与正常人比较,5-HT、VIP、β-EP检测值下调明显,有统计学意义(p<0.05);功血患者与消化道肿瘤患者比较,VIP、β-EP检测值下调明显,有统计学意义(p<0.05);ITP患者与正常人、功血患者及消化道肿瘤患者比较,5-HT、VIP检测值下调明显,均具有统计学意义(p<0.05)。β-EP检测值比较中,ITP患者较功血患者有所下调,有统计学意义(p<0.05)。4结论与创新4.1结论通过基础与临床研究,结论如下:①健脾益气摄血方是在“脾主统血”理论下,根据“从脾论治”的原则拟定的方药,以益气健脾、摄血止血为基本治则而立。通过基础实验和临床试验证实,健脾益气摄血方能够有效提高脾不统血型ITP患者血小板计数,改善出血症状,疗效与强的松相近,有一定的临床推广意义。②健脾益气摄血方可能通过脑-肠轴之间的神经内分泌网络系统调节调节β-EP、5-HT、VIP水平,激活止血机制,而这一调节过程早于强的松发挥止血效果前。说明脑-肠轴可能是“脾主统血”生理功能调节的靶器官,而脑-肠肽则是“脾主统血”功能调节的重要物质基础。③血液神经递质在同属“脾不统血证”的不同疾病中表达各异。其中,VIP、β-EP表达水平下调在非免疫性疾病具有共性特征,而5-HT在免疫性疾病,特别是出血性免疫疾病中其表达水平升高,具有明显的个性特征,其与血小板功能状态有一定关系,也可能是一种有利于止血的保护机制。4.2创新点首次提出“脾主统血”的脑-肠轴功能调控理论,并通过基础与临床研究证实了该理论科学性与实用性。