家蚕抗菌肽DefensinB的遗传多样性及分子进化

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昆虫的先天免疫由细胞免疫和体液免疫组成,抗菌肽的合成和分泌是体液免疫的重要组成部分,对昆虫起着重要的防御作用。抗菌肽作为重要的免疫效应因子,其进化方式一直是人们关注的重点。家蚕是重要的经济昆虫,也是鳞翅目昆虫的研究模式代表。目前,在家蚕中已经发现有7种抗菌肽家族——Cecropin,Moricin,Enbocin,Gloverin,Lebocin,Attacin和Defensin,其中防御素Defensin为富含半胱氨酸的抗菌肽。在家蚕中,Defensin家族有两个成员,即DefensinA和DefensinB。在前期研究中,我们初步发现家蚕不同品种间DefensinB基因序列存在差异。本论文通过对不同地理品系的80个家蚕品种、6个不同地区采集的野蚕抗菌肽DefensinB基因进行扩增并测序,通过对DefensinB基因的核苷酸多态性分析、中性检测和系统发育分析,论文研究主要获得以下结果:1、80个家蚕品种DefensinB基因的测序结果显示:所有家蚕品种DefensinB的CDS区长度一致,为243bp,序列高度保守,只发生少数碱基的替换;但内含子长度不同,存在约200bp的差异。2、家蚕各品种的DefensinB基因按照长短和序列差异进行分类,长型可以分成L1、L2和L3三种,前两种是热带品种的独享的单倍型,L3是日本、欧洲和热带三个品种的共享单倍型;短型分成S1、S2和S3三种,S1是中国品种的独享单倍型,S2是日本品种的独享单倍型,S3是欧洲和日本品种的共享的单倍型。单倍型网络中介图显示长型DefensinB与短型DefensinB可能由祖先基因独立进化而来。3、核苷酸多态性分析表明:家蚕DefensinB基因的核苷酸多态性π比野蚕降低了35%,群体动力参数θ降低了75%。说明家蚕在驯化过程中DefensinB基因发生了多态性丢失。4、对家蚕和野蚕的DefensinB基因进化方式进行分析,首先进行中性检测,发现家蚕Tajima’s D值为4.74401,统计结果极显著(***,p<0.001),显示家蚕DefensinB基因偏离了中性进化模型,说明在进化过程中受到了选择压力;而野蚕的Tajima’s D值为0.08767,统计结果不显著,符合中性进化模型。说明家蚕和野蚕的DefensinB基因经历了不同的进化模式。5、通过构建DefensinB基因的系统发育树可以发现:长型、短型品种形成两个明显的分支,在短型分支中,S1和S2位于同一个亚支,S3自成一个亚枝;在长型分支中,L1和L2单独形成一个亚支,L3品种自成一个亚支。除了九江和南昌的野蚕聚在一支,其他地区的野蚕分散分布在进化树中。6、家蚕DefensinB基因总体受到的选择压力为净化选择,并没有发现正选择位点。综上,家蚕抗菌肽DefensinB基因的核苷酸多态性比野蚕低,家蚕DefensinB在进化过程中受到了净化选择的压力,而野蚕DefensinB则是经历了中性进化。
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