【摘 要】
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目的尽管在过去十几年中,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）的出现开启了肺癌治疗的新纪元,但约12个月的治疗期后,患者不可避免地对EGFR-TKIs产生耐药。EGFR-TKIs耐药的机制复杂,一直以来困扰着医患双方。于此,本文在体内和体外探索了 c-Fos在肺癌吉非替尼耐药中的作用,以及c-Fos影响吉非替尼敏感性的机制。方法（1）通过qRT-PCR及Western blot实验
【基金项目】
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国家自然科学基金项目的资助（No.82172825）；
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目的尽管在过去十几年中,表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKIs）的出现开启了肺癌治疗的新纪元,但约12个月的治疗期后,患者不可避免地对EGFR-TKIs产生耐药。EGFR-TKIs耐药的机制复杂,一直以来困扰着医患双方。于此,本文在体内和体外探索了 c-Fos在肺癌吉非替尼耐药中的作用,以及c-Fos影响吉非替尼敏感性的机制。方法（1）通过qRT-PCR及Western blot实验检测c-Fos在对吉非替尼敏感和耐药的人肺癌细胞系中的表达情况。（2）使用shRNA在吉非替尼耐药的H1975和PC9GR肺癌细胞系中敲低c-Fos,进一步通过CCK-8、克隆形成实验、流式细胞术凋亡实验等验证敲低c-Fos对吉非替尼耐药的影响。（3）为探索c-Fos影响人肺癌细胞对吉非替尼敏感性的机制,通过划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验观察抑制c-Fos对吉非替尼耐药的人肺癌细胞上皮——间质转换（EMT）的影响。（4）使用GEPIA、STRING数据库分析c-Fos与EMT相关基因的联系,随后通过qRT-PCR及Western blot实验对敲低c-Fos的吉非替尼耐药细胞株加以验证。（5）体内实验部分,通过动物皮下移植瘤模型进一步验证c-Fos与EGFR-TKIs耐药的关系及其机制。将敲低c-Fos和转染空白载体的吉非替尼耐药细胞系PC9GR移植到裸鼠腋窝中后部皮下,构建异种移植瘤。每隔一日测量肿瘤体积,同时给予吉非替尼治疗。治疗结束后处死小鼠并取出肿瘤组织,进行拍照、称重、蛋白提取、固定、石蜡包埋及免疫组化染色。结果（1）对吉非替尼耐药的细胞系均高表达c-Fos。（2）CCK-8、克隆形成实验流式细胞术凋亡实验等结果表明抑制c-Fos表达使吉非替尼耐药细胞系对吉非替尼的IC50值降低、增殖能力减弱、凋亡增多,恢复了耐药肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。（3）划痕实验及Transwell迁移和侵袭实验结果显示,敲低c-Fos可以抑制吉非替尼耐药肺癌细胞的迁移、侵袭能力,说明抑制c-Fos可以逆转耐药细胞EMT过程。（4）公共数据库结果显示,c-Fos的表达与ZEB1、Vim呈正相关,与E-cad、N-cad负相关。qRT-PCR及Western blot实验显示在抑制c-Fos后,吉非替尼耐药细胞系ZEB1、N-cad、Vim的表达水平下降而E-cad的表达升高,提示抑制c-Fos可以减弱耐药细胞EMT。（5）动物移植瘤组织Western blot及免疫组化染色显示c-Fos敲低组ZEB1、N-cad、Vim的表达水平随着c-Fos的抑制而降低,E-cad的表达则相反。动物实验进一步证实了抑制c-Fos可以在体内通过逆转EMT提高耐药肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。结论抑制c-Fos可以通过逆转EMT途径从而恢复耐药的肺癌细胞对吉非替尼的敏感性。c-Fos有望成为EGFR-TKIs耐药的肺癌患者的治疗新靶点。
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