【摘 要】
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本实验采用同源重组双交换的方法分别将sgcR1&sgcR2和sgcR2基因阻断，研究sgcR1和sgcR2在体内的生物学功能。设计PCR引物，以S. globisporusC-1027总DNA为模板，扩增包含目的基因
【出 处】
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中国协和医科大学 中国医学科学院 北京协和医学院 清华大学医学部
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本实验采用同源重组双交换的方法分别将sgcR1&sgcR2和sgcR2基因阻断，研究sgcR1和sgcR2在体内的生物学功能。设计PCR引物，以S. globisporusC-1027总DNA为模板，扩增包含目的基因上游和下游两侧的片段，将两片段克隆至质粒pKC1139的多克隆位点，并在两片段中间插入硫链丝菌素抗性基因片段(tsr)作为筛选标记。将重组质粒通过接合转移的方法从大肠杆菌E. coliET12567/pUZ8002转移至S.globisporus C-1027。通过温度和抗性双重筛选得到了具有硫链丝菌素抗性(Thior)而阿普霉素敏感(Ams)的接合子，这些接合子可能发生了同源双交换。利用PCR对其进行验证，最终获得了发生同源双交换的突变株，sgcR1&sgcR2突变株命名为S.globisporus R1R2KO，在其基因组上，sgcR1&sgcR2内部大部分片段被tsr取代；sgcR2突变株命名为S. globisporus R2KO，在其基因组上，sgcR2内部大部分片段被tsr取代。突变株S.globisporus R1R2KO和S.globisporus R2KO不能产生力达霉素，表明sgcR1和sgcR2是力达霉素生物合成的重要调控因子。
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