猪水肿病（Edema disease of swine,ED）是由某些溶血性大肠杆菌引起断奶仔猪的一种毒血症。临床特征是头部和胃壁等处水肿、共济失调、惊厥和麻痹等。该病发病急、死亡快,往往来不及治疗,死亡率很高。该病主要通过消化道感染,因此针对其黏膜感染的特点,研制有效的刺激黏膜免疫系统产生局部免疫应答,进而引起全身性系统免疫应答的口服疫苗,对该病的防制具有重要意义。本研究对猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株O₁₃₉的部分生物学特性以及作为口服疫苗的免疫效果进行了研究。突变菌株O₁₃₉和大肠杆菌O₁₃₉生长曲线测定结果显示,突变菌株O₁₃₉生长良好,与大肠杆菌O₁₃₉无明显差别。提取突变菌株O₁₃₉和大肠杆菌O₁₃₉的毒素,测定其对昆明鼠和vero细胞的半数致死量,大肠杆菌O₁₃₉毒素对昆明鼠的半数致死量为287.17μg/ml,对vero细胞的半数致死量为0.547μg/ml,而突变菌株O₁₃₉毒素对昆明鼠和vero细胞无致病性,结果表明突变菌株O₁₃₉毒素毒性明显低于大肠杆菌O₁₃₉毒素毒性。突变菌株O₁₃₉在不含萘啶酮酸（Nal）的LB培养基中连续传50代后,用PCR和酶切方法对第50代突变菌株O₁₃₉的SLT-Ⅱe*基因序列进行鉴定并测序,结果与第1代突变菌株O₁₃₉的SLT-Ⅱe*序列进行比对,同源性为100%。昆明鼠口服2×10⁹CFU突变菌株O₁₃₉后仍然健活,无不良反应,说明该菌对小鼠安全。突变菌株在小鼠肠道内定植时间检测的结果显示,突变菌株O₁₃₉可以在小鼠肠道内至少存活3天。用突变菌株O₁₃₉口服免疫Balb/c小鼠,测定各时期小鼠体重,并检测其血清中的IgG抗体及粪便和肠黏液中的sIgA抗体水平。结果表明突变菌株O₁₃₉口服免疫小鼠后不影响小鼠增重。间接ELISA方法检测结果显示,口服免疫组小鼠首次免疫后第7、21、28、35、42天,在其血清中检测到抗大肠杆菌O₁₃₉的O-抗原和SLT-Ⅱe B蛋白的IgG抗体（P/N>2）,在首次免疫后第7、14、21、28、35、42天,检测到抗F18ab菌毛蛋白的IgG抗体（P/N>2）;在首次免疫后第35天从小鼠粪便中检测到抗大肠杆菌O₁₃₉的O-抗原的sIgA抗体（P/N>2）,抗SLT-Ⅱe B蛋白和抗F18ab菌毛蛋白的sIgA抗体水平接近阳性值(P/N_{SLT-Ⅱe B}=1.825,P/N_F18ab=1.961)。第三次免疫后第14天,在小鼠肠黏液中检测到抗大肠杆菌O₁₃₉的O-抗原、SLT-Ⅱe B蛋白、F18ab菌毛蛋白的相应sIgA抗体（P/N>2）。实验结果说明该突变菌株具有良好的免疫原性,能诱导小鼠体内产生IgG和sIgA抗体。对口服免疫小鼠进行了淋巴细胞增殖检测及攻毒保护实验。淋巴细胞增殖实验以SLT-Ⅱe B蛋白和ConA作为抗原刺激物,检测其对小鼠脾淋巴细胞的刺激指数,结果显示口服免疫组与对照组差异显著（P<0.05）。实验结果说明该突变菌株能引起小鼠体内T淋巴细胞增殖反应。攻毒保护实验结果显示,口服免疫突变菌株对小鼠能够提供良好的保护,保护率为75%（15/20）。本研究结果证明,该大肠杆菌基因突变菌株在小鼠体内激发了体液免疫和细胞免疫反应,对小鼠有很好的保护作用,可作为猪水肿病口服毒力基因缺失疫苗研究的候选菌株。