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新城疫（Newcastle Disease,ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）引起的一种禽类急性、烈性、高度接触性传染病,其临床症状主要以呼吸道和消化道为主,表现为发热、呼吸困难、腹泻、黏膜出血和坏死,病程较长时还会伴有神经症状。新城疫给养禽业造成了严重的经济损失。目前,预防ND的有效方法是免疫接种。市面上最常使用的是传统疫苗,但活疫苗和灭活苗在实际应用中均存在一些弊端。活疫苗可能产生生物污染以及毒力返祖,而灭活苗诱导较低水平的黏膜免疫和细胞免疫并且可能会因灭活不彻底而引起相关疾病。DNA疫苗因其具有成本低、易于生产、保存和运输以及能激活先天免疫途径等优点而被广泛应用。但DNA疫苗免疫原性弱,给药方式为肌注,肌注后体内存在的核酸酶能降解质粒DNA,导致其生物利用率降低;此外,质粒DNA很难穿过细胞膜,只有部分抗原到达抗原递呈细胞（APCs）诱发免疫反应。生物降解材料具有安全、无毒、生物相容性好、可生物降解、缓释等优点而被广泛应用作为药物递送系统。利用可生物降解材料包裹质粒DNA可避免质粒DNA降解、促进其提高、诱导黏膜免疫,有利于实现缓释。本试验以课题组自行合成的生物材料O-2’-HACC为载体,以NDV F基因真核表达载体pVAX Ⅰ-F（o）-C3d6为载药模型,采用离子交联法制备pFDNA-O-2’-HACC-NPs,并对 pFDNA-0-2’-HACC-NPs 理化特性、稳定性、细胞毒性和免疫效果等进行了详细研究。试验结果表明:1)确定了 pFDNA-0-2’-HACC-NPs的制备工艺,即0-2’-HACC浓度为1.0mg/mL、DNA浓度为100μg/mL、搅拌速度为1200 r/min;,优化工艺制备的pFDNA-0-2’-HACC-NPs形状规则、表面光滑、外形圆整,平均粒径为（202.3±0.52）nm,Zeta 电位为（50.8±8.21）mV,包封率为（90.74±1.10）%,载药量为（49.84±1.20）%;2)体外抗DNaseⅠ降解试验结果表明,pFDNA-O-2’-HACC-NPs能保护质粒DNA免受核酸酶降解;3)体外释放试验结果表明,pFDNA-O-2’-HACC-NPs在体外释放是一次突释后的连续缓释过程;4)体外表达试验结果表明,经O-2’-HACC-NPs包裹后NDVF基因质粒DNA没有破坏,保持了其良好的生物活性;5)贮藏稳定性试验结果表明,在37℃、20℃、4℃、-20℃贮藏3周pFDNA-O-2’-HACC-NPs外观无明显变化,稳定性良好;室温贮藏3个月后仍能诱导较强的免疫反应;6)细胞毒性试验结果表明,pFDNA-O-2’-HACC-NPs毒性较小,具有较高的安全性;7)SPF鸡体内免疫接种试验结果表明,pFDNA-O-2’-HACC-NPs滴鼻免疫与肌注相比,激活黏膜免疫应答部位的能力更强,并诱导机体产生较强的细胞免疫、体液免疫、黏膜免疫和含量较高的特异性IgG和IgA。此外,IL-2、IL-4和IFN-γ分泌量和免疫鸡脾淋巴细胞转化率均有明显变化;攻毒后,黏膜免疫组血清中IgG、IL-2、IL-4和IFN-γ含量持续升高,并能达到较高的保护率;8)pFDNA-O-2’-HACC-NPs能有效刺激CD4+、CD8+的产生,且滴鼻组含量显著高于相应肌注组,表明黏膜免疫途径所诱导表达的细胞因子明显高于非黏膜免疫途径。本试验构建了以O-2’-HACC为载体的DNA疫苗黏膜免疫递送系统,实现了质粒DNA在体内缓释和诱导黏膜免疫的目的,并达到了保护抗原、提高免疫效果的目标,为发展一种安全、高效并具有优良性能的基因递送载体提供了理论依据。