MP1基因在辽宁绒山羊皮肤的表达研究

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辽宁绒山羊是我国特有的品种,并且是禁止基因外流的宝贵资源,其羊绒产量居全国首位,因此,研究与羊绒相关基因的功能就更具实际生产意义。前期,我们实验室通过建库、测通获得了辽宁绒山羊的新基因MP1(MEK Partner 1)的全长序列,首先对MP1基因进行生物信息学分析,检测其核酸及氨基酸的同源性,建立进化树等。然后通过RT-PCR检测MP1基因在各组织中的表达,再利用qPCR方法检测其在毛囊生长的不同时期的初、次级毛囊中的表达含量,最后对绒山羊兴盛期皮肤进行原位杂交并对其进行表达位点分析。为进一步研究MP1基因是否与羊绒细度之间存在某种关系,利用本实验室已有的Noggin基因RNA干扰的慢病毒,感染辽宁绒山羊皮肤细胞后,再利用qPCR检测其对MP1基因表达的影响,为培育出具有优良经济性状的绒山羊提供一定的分子理论基础。结果如下:(1)MP1基因编码的蛋白质包含124个氨基酸,分子量为13.64 KD,是一个疏水性蛋白。MP1含有α螺旋结构(25.81%)、延伸链结构(33.87%)和无规卷曲(40.32%)。无跨膜结构域,无信号肽。MPl的氨基酸序列包含一个保守的MAPKKl-Int结构域,含有有3个可能成为磷酸化位点的Ser。RT-PCR检测结果显示:仅在皮肤、心脏中MP1基因有表达,而在肝、肾、肺、脾中未发现其表达。qPCR检测毛囊在兴盛期时,MP1基因在次级毛囊的表达量为初级毛囊的1.65倍,退行期MP1基因在次级毛囊的表达量为初级毛囊的3.25倍。原位杂交分析发现:MP1在内根鞘上有明显的表达,在毛干、外根鞘以及毛囊乳突中无表达。(2)成功构建出Noggin基因RNAi的慢病毒载体,Noggin基因被干扰后,qPCR检测发现MP1基因起负调控作用,MP1基因的相对表达量出现上调的趋势。由以上结果可以得出以下结论:(1)通过对MP1基因在生物信息学,荧光定量以及原位杂交等方面的研究,推测MP1对绒山羊皮肤细胞的生长发育产生影响,可能与毛囊的生成及再上皮化过程有关,且并具有能够使羊毛变细的作用。(2)推测MP1基因可能存在于Noggin基因表达调控的下游,并通过其与Noggin基因之间存在的某种关系,实现BMP-MAPK途径共同作用来调节绒山羊的表皮及毛囊的的稳态和发育过程。
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