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目的:通过巯基螯合剂DEM对内皮细胞二甲基精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性的影响,探讨氧化应激导致NO通路功能障碍的可能机制及其在动脉粥样硬化发病中的作用。方法:在培养的内皮细胞中加入不同剂量DEM、作用不同时间,以确定能明显降低细胞内GSH含量但却不明显影响细胞存活率的最适DEM作用浓度和作用时间。以该剂量DEM预处理内皮细胞30分钟后去除DEM,换成无血清培养基继续培养0、0.5、2、6、12、24小时后,检测各时间段的细胞内GSH含量、DDAH活性及上清液中NO含量。实验按照6个不同的检测点分成6大组,分别为0、0.5、2、6、12、24小时组。分别设对照组与加药组。细胞存活率检测用MTT法;细胞内GSH含量用荧光测定法;细胞内DDAH活性用分光光度法检测与ADMA反应后生成的L-瓜氨酸的生成量来表示;上清液中NO含量用NO试剂盒检测。结果:MTT结果显示DEM最佳的作用浓度为0.6μmol/L,作用时间为30分钟,该浓度DEM处理内皮细胞30分钟后,GSH含量已明显降低,但内皮细胞生存率仅比对照组轻微下降,未明显影响细胞存活率;GSH浓度的检测显示,经DEM预处理后半小时细胞内GSH含量已较对照组明显降低(降低28.7%,p<0.05),随后逐步回升,12小时反超正常水平,随后回落,至24小时时恢复至正常水平;DDAH活性的检测显示,经DEM预处理后DDAH活性随之降低,至2小时时达最低值(降低80.07%,p<0.01),以后DDAH活性逐渐恢复,24小时后亦出现反超,呈类似于GSH