【摘 要】
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近年来,随着水产养殖业的不断扩大,各类水产疾病频繁出现。其中虹彩病毒(Iridoviridae)是在养殖业中危害最为严重的一种病毒性疾病,该病毒可在极短时间内导致水产动物大量死亡,长期以往将对我国水产养殖业的可持续发展造成严重的威胁。因此,研究开发可以防控虹彩病毒的药物具有重要的意义。本研究以二甲双胍(Metformin)、青蒿素及其衍生物为实验材料,首先利用体外宿主细胞对二甲双胍、青蒿素及其衍生
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近年来,随着水产养殖业的不断扩大,各类水产疾病频繁出现。其中虹彩病毒(Iridoviridae)是在养殖业中危害最为严重的一种病毒性疾病,该病毒可在极短时间内导致水产动物大量死亡,长期以往将对我国水产养殖业的可持续发展造成严重的威胁。因此,研究开发可以防控虹彩病毒的药物具有重要的意义。本研究以二甲双胍(Metformin)、青蒿素及其衍生物为实验材料,首先利用体外宿主细胞对二甲双胍、青蒿素及其衍生物的细胞安全浓度进行研究,其次根据药效分别对石斑鱼虹彩病毒(Grouper Iridovirus Guangxi,SGIV-Gx)和大口黑鲈虹彩病毒(Largemouth Bass Virus,LMBV)的抗病毒效果进行分析,进一步通过分析药物对病毒粒子及病毒侵入过程的影响,探究药物的抗病毒作用机制。研究结果如下:(1)利用光学显微镜观察及CCK-8法检测细胞存活率,分析二甲双胍的细胞安全工作浓度。结果显示,二甲双胍在石斑鱼脾脏组织细胞系(GS细胞)中的安全使用浓度为≤250μg/mL,最佳工作浓度为125μg/mL。(2)通过光镜观察细胞形态变化、实时荧光定量PCR技术(RT-qPCR)检测病毒衣壳蛋白MCP基因与病毒囊膜蛋白VP19基因相对表达量、核酸适配体-荧光分子探针技术三种方法,证明了二甲双胍对石斑鱼虹彩病毒在体外具有良好的抑制作用,其抑制率可达到71.28%。(3)通过分析二甲双胍对石斑鱼虹彩病毒粒子的作用,以及二甲双胍对病毒感染宿主细胞过程的影响,发现二甲双胍主要通过破坏石斑鱼虹彩病毒粒子的结构发挥抗病毒作用。其次,二甲双胍能够干扰石斑鱼虹彩病毒对宿主细胞的吸附,以及影响病毒在宿主细胞内的复制,但二甲双胍对病毒侵入宿主细胞的过程没有影响。(4)利用光学显微镜观察及CCK-8法检测细胞存活率,分析了青蒿素及其衍生物在胖头鲤肌肉细胞(Fathead Minnow,FHM)中的安全浓度。结果显示,相关化合物的安全工作浓度分别是:青蒿素≤500μg/mL、蒿甲醚≤250μg/mL、青蒿琥酯≤62.5μg/mL、双氢青蒿素≤250μg/mL。(5)随后,我们系统分析了青蒿素及其衍生物在体外抗大口黑鲈虹彩病毒的效果。光镜观察结果、RT-qPCR技术检测结果和荧光分子探针技术检测结果均证实,青蒿琥酯和双氢青蒿素对大口黑鲈虹彩病毒具有良好的抑制作用。综上所述,二甲双胍对石斑鱼虹彩病毒有较好的抑制作用,主要通过破坏石斑鱼虹彩病毒粒子的结构发挥抗病毒作用。青蒿素衍生物青蒿琥酯和双氢青蒿素对大口黑鲈虹彩病毒有良好抑制作用。本研究结果对于开发防治虹彩病毒感染的药物研究具有重要意义,为抗虹彩病毒新型渔用药物研发提供了数据支持和理论依据。
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