苦楝皮及川楝素对妊娠早期小鼠胚胎丢失的影响

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苦楝皮主要用于动物的驱虫,川楝素主要用于蔬菜和瓜果的驱虫,它们在动物体内的蓄积或在蔬菜、瓜果上残留是否对人类尤其是对孕妇有潜在的影响呢?研究苦楝皮、川楝素对动物的胚胎毒性和免疫毒性作用,以及剂量和效应关系,对于丰富中药药理内容,保证苦楝皮、川楝素作为畜牧业和农业上杀虫剂的安全使用,具有重要的意义。本试验主要通过检测苦楝皮、川楝素对妊娠小鼠子宫免疫状态的影响,从细胞和分子水平阐述苦楝皮、川楝素的作用机制,为临床安全用药提供参考依据。1苦楝皮的致流产作用将10周龄孕鼠随机分为对照组和0.2g,0.4g,0.6g,0.8g,1.0g不同剂量苦楝皮水煎液组,于孕5~7d灌胃给药,孕8d眼球放血致死,取血清和右侧子宫匀浆液,左侧子宫固定。结果发现,灌胃苦楝皮水煎剂诱导早期小鼠发生胚胎吸收,孕鼠流产率上升。苦楝皮对孕鼠的流产作用不是呈剂量依赖性关系的,而是呈倒挂的“钟型现象”,即在一定剂量范围内苦楝皮对孕鼠的流产作用明显。用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清和子宫匀浆液中IL-2和IL-4的含量,免疫组化检测了免疫细胞F4/80+ MΦ,CD4+,CD8+ T淋巴细胞的含量变化,结果显示随着流产的发生,IL-2的含量上升,IL-4的含量下降,F4/80+ MΦ,CD4+,CD8+ T淋巴细胞含量都明显上升,CD4+/CD8+比值上升。表明,苦楝皮引起的孕鼠子宫局部Th1细胞因子IL-2增多,Th2细胞因子IL-4减少,打破了Th1/Th2的平衡,促进了Th1型免疫反应,抑制了Th2型免疫反应,引起F4/80+ MΦ的活化,CD4+/CD8+比值上升,是苦楝皮引起小鼠早期胚胎死亡的免疫毒理学原因。2川楝素的致流产作用将10周龄孕鼠随机分为对照组和川楝素处理组,对照组腹腔注射10%丙二醇生理盐水,试验组剂量分别为小鼠腹腔注射LD50的1/60,1/30,1/20,1/15,于孕5d~7d腹腔注射给药,孕8d眼球放血致死,取血清和右侧子宫匀浆液。结果发现,用药后,孕鼠的流产率上升,并且随着用药剂量的增加流产率逐渐上升。由此说明,川楝素对孕鼠的流产效果较好,流产率与剂量有一定关系。用ELISA法检测血清和子宫匀浆液中Th1型细胞因子代表TNF-α,INF-γ的含量,免疫组化检测了免疫细胞F4/80+ MΦ,CD4+,CD8+ T淋巴细胞的含量变化,结果显示随着流产的发生,TNF-α,INF-γ显著高于对照组,F4/80+巨噬细胞,CD4+,CD8+ T淋巴细胞含量上升,CD4+/CD8+比值明显上升,表明川楝素引起孕鼠子宫局部Th1型细胞因子TNF-α,INF-γ增多,F4/80+ MΦ的活化,CD4+/CD8+比值上升是川楝素引起小鼠早期胚胎死亡的免疫学原因。
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