腮腺沃辛瘤淋巴滤泡微环境特征的初步研究

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沃辛瘤好发于老年男性吸烟患者,胚胎发育学认为沃辛瘤的形成与腮腺导管异位于淋巴组织有关。沃辛瘤肿瘤上皮细胞为假复层结构的嗜酸性上皮细胞,肿瘤间质为淋巴样组织。大部分沃辛瘤病变中可见淋巴滤泡形成。参与淋巴滤泡形成的微环境主要涉及T淋巴细胞、B淋巴细胞、成纤维网状细胞及其分泌的胶原,以及各种细胞因子等。因此,本研究主要从沃辛瘤淋巴滤泡表型、滤泡树突状细胞网型、淋巴间质免疫细胞、细胞因子、成纤维网状细胞、胶原等方面探讨沃辛瘤淋巴滤泡形成的微环境特点。目的探讨沃辛瘤淋巴滤泡形成微环境的共性及个性,初步揭示沃辛瘤淋巴滤泡形成的机理。方法(1)淋巴滤泡免疫表型及FDCMP鉴别:应用抗体套餐(CD3、CD10、CD20、Bcl-2、Bcl-6、Ki-67)免疫组化法(Immunohistochmeistry,IHC)鉴别淋巴滤泡免疫表型;利用IHC法(CD21抗体和D2-40抗体)检测滤泡树突状细胞,分析滤泡树突状细胞网型(follicular dendritic cell meshwork pattern,FDCMP)特点。(2)免疫细胞类型鉴别:IHC法鉴别沃辛瘤中CD3、CD4、CD8、CD14、T-bet(Th1)、Gata3(Th2)、RORγt(Th17)、Foxp3(Treg)细胞类型,观察各类型免疫细胞分布部位。(3)免疫细胞因子检测:应用GSH-INF-3-1抗体芯片技术检测沃辛瘤细胞因子表达特点,并与淋巴结进行比较,分析两者之间淋巴细胞因子表达差异。(4)成纤维网状细胞鉴定及胶原蛋白检测:应用IHC法检测鉴定沃辛瘤成纤维网状细胞(podoplanin抗体、α-SMA抗体)、应用Masson染色法检测沃辛瘤胶原分布特点,并与淋巴结进行比较。IHC法检测沃辛瘤IV型胶原表达情况。结果(1)淋巴滤泡免疫表型及FDCMP特点:抗体套餐检测结果显示沃辛瘤淋巴滤泡免疫表型符合良性淋巴滤泡典型增生的免疫表型。沃辛瘤FDCMP有如下几个特征:(1)FDCMP以典型及退化型为主;(2)个别FDCMP网球较大,少数FDCMP可融合呈背靠背或多结节或肠道状等形状。(2)免疫细胞分布特点:沃辛瘤中CD3+在生发中心阳性表达,生发中心外周强阳性,CD4+在生发中心偶见,生发中心外周散在阳性表达;CD8+生发中心及外周散在表达。T-bet、Gata3、RORγt阳性细胞分布于生发中心外周,Foxp3+Treg阳性细胞在生发中心外周及内部均可见;沃辛瘤中Th1及Foxp3+Treg阳性细胞的数量明显高于Th2、Th17阳性细胞的数量,前者处于优势状态。Th1/Th2比值为3.5/1,而Th17/Foxp3+Treg比值为1/6.5。CD14+阳性细胞密集分布于淋巴间质。(3)细胞因子表达特点:分别检测了沃辛瘤及淋巴结中的40个细胞因子,沃辛瘤与淋巴结的各类型细胞因子表达量差异较大,甚至相差上万倍。参与淋巴滤泡形成的重要细胞因子如CXCL13、ICAM-1、IL-5等在两者之间表达无统计学差异,但是IL-17、MIP-1a表达有统计学差异。(4)成纤维网状细胞及胶原蛋白分布特点:沃辛瘤淋巴间质可见丰富的podoplanin(D2-40)、α-SMA阳性细胞,即沃辛瘤内富含成纤维网状细胞,这与淋巴结相类似。Masson染色结果显示沃辛瘤淋巴间质胶原分布不均匀,表现为斑片状或网状,而淋巴结胶原分布较均匀;IHC(IV型胶原)检测结果显示沃辛瘤淋巴间质可见IV型胶原呈网状分布。结论(1)沃辛瘤淋巴滤泡免疫表型具有良性淋巴组织反应性增生的免疫表型特点,FDCMP呈非肿瘤性表现。(2)从生发中心内部及外周结构上来说,Foxp3+Treg在淋巴滤泡形成过程中作用部位与Th1、Th2、Th17不同。沃辛瘤中Th1/Th2及Th17/Foxp3+Treg平衡失调。(3)沃辛瘤与淋巴结在个别细胞因子表达、胶原分布等方面存在迥同,这些迥同影响着淋巴滤泡增生程度、淋巴滤泡分布及FDC网型特征。
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