本研究报道了可用于实现牛血铜锌超氧化物歧化酶(Cu,Zn—SOD)规模化生产的简便易行新工艺。该工艺包括红细胞连续分离和热变性、超滤、丙酮沉淀、离子交换等技术。应用该工艺于SOD规模化生产中,生产成本降低89.1%。SOD收率、纯度、比活等与传统方法比较无明显差别。 新生产工艺采用碟式分离机分离红细胞,建立了快速简便的红细胞连续分离技术,分离速度可达2000 kg血/h;以冷冻红细胞为原料制备SOD,解决了原料长期保存问题;通过铜锌盐存在下的一次热变性方法除去血红蛋白,彻底革除传统方法中的氯仿和乙醇;利用超滤技术浓缩提取液,减少了丙酮用量90%;通过离子交换法,进一步纯化了SOD。实验结果表明,冷冻红细胞和新鲜红细胞制备的SOD在收率、纯度、比活等方面无明显差别;热变性、超滤、丙酮沉淀等各工艺步骤酶的活性以及收率基本稳定。冷冻红细胞热变性后,酶的平均总活力一般稳定在72.86万U/kg红细胞;超滤浓缩后酶的总活力平均为59.66万U/kg红细胞,回收率为81.89%;丙酮沉淀后酶的总活力平均为43.95万U/kg红细胞,回收率为60.33%;DEAE柱层析后酶的总活力平均为33.07万U/kg红细胞,酶回收率45.38%。新鲜红细胞热变性后,酶的平均总活力一般稳定在86.93万U/kg红细胞;超滤浓缩后酶的总活力平均为61.05万U/kg红细胞,回收率为73.73%;丙酮沉淀后酶的总活力平均为51.35万U/kg红细胞,回收率为59.31%;DEAE柱层析后酶的总活力平均为36.10万U/kg红细胞,酶回收率42.66%。 在内蒙古大板生化制品厂的规模化生产条件下,投料14批,共570.5 kg红细胞,得到SOD冻干粉36069.35 mg,平均比活达到6164.19U/mg·pro,平均收率为34.41万U/kg红细胞。