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人溶菌酶是存在于人体正常体液和组织中的一种非特异性免疫因子。它对人体完全无毒副作用，同时具有抗菌、消炎、抗病毒、抗肿瘤等作用，可被开发成口含片、胶囊、口香糖及口腔喷雾剂等产品形式。 由于人溶菌酶来源有限，因此本研究提出通过遗传工程方法，利用毕赤酵母细胞生产人溶菌酶，一方面解决了人溶菌酶资源稀缺的问题，另一方面则能创造更大的经济效益。由于人胎盘组织中富含hLZM基因的mRNA，因此从人胎盘组织中提取细胞总RNA作为模板，根据GENEBANK中已发表的hLZM基因的cDNA序列，设计合成特异引物，经逆转录合成hLZM基因的cDNA序列，并以此cDNA序列为模板，经PCR扩增hLZM编码基因。经DNA序列分析证明与已发表的hLZM cDNA序列完全一致。 通过EcoRⅠ和NotⅠ双酶切作用，将hLZM的编码基因按照质粒阅读框的转译方向插入到表达质粒pPIC9K的MCS中，构建重组表达质粒pPIC9K／hLZM。利用电转化方法转化表型为His~-的宿主菌KM71，利用MD培养基筛选到近1 200个His~+转化子。再经G418抗性的二次筛选，获得15株含高拷贝人溶菌酶基因的重组毕赤酵母转化子。当以甲醇进行诱导表达时，成功获得了1株高效分泌表达的重组菌株Pp135，其表达量为317mg／L，酶活性为32035u／mL。 菌株Pp135经甲醇诱导，可将人溶菌酶分泌到培养基中，因此可在发酵上清液中直接检测到人溶菌酶的活性。该检测采用以溶壁微球菌(Micrococcus lysodeikticus)为试验菌的琼脂平板扩散法。研究发现培养基BGMM、BMM、MMC等均能诱导菌株Pp135表达人溶菌酶，由于培养基BGMM和MMC中存在干扰溶菌酶纯化的杂蛋白，并使溶菌酶产品带有异味和色素，因而确定利用BMM培养基进行重组菌株Pp135的诱导表达。实验最终获得381mg／L的表达量，若继续优化发酵条件，还有可能进一步提高菌株Pp135的表达水平。 本研究为人溶菌酶的工业化规模生产奠定理论基础，这对带动人溶菌酶的规模化生产具有特殊意义，其推广应用将给社会带来相当的经济效益。