目的:研究中药复方健脾养阴解毒方（Jianpi Yangyin Jiedu Decoction）联合靶向药瑞戈非尼（regorafenib）对肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）转移和复发的干预作用,并基于肝癌细胞上皮-间质转化（Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）探讨其作用机制,为HCC药物治疗提供新策略,为临床中西医结合治疗肝癌提供科学依据。方法:1.体内实验:（1）将MHCC-LM3肝癌细胞注射至雄性BALB/c裸鼠腋后皮下建立皮下瘤,5周后取皮下瘤组织块种植入新的雄性BALB/c裸鼠肝脏包膜下,构建裸鼠原位肝癌模型。1周后按照体重随机分为对照组（Control组）、瑞戈非尼组（R组）、健脾养阴解毒方组（J组）、瑞戈非尼联合健脾养阴解毒方组（R+J组）,每组10只。各药物干预组分别给予相应药物灌胃,剂量按照人鼠等效剂量换算,对照组予以生理盐水,持续干预4周。每3天观察裸鼠一般情况,称取裸鼠体重。4周后处死小鼠,取原位瘤称重并计算各组抑瘤率;用连续肺组织切片HE染色观察药物对肝癌肺转移的影响;用Real-time PCR、Western blot及免疫组化检测肿瘤组织EMT标记分子E-cadherin、Vimentin的表达变化,EMT调控相关转录因子Snail、Slug、ZEB1表达,以及与EMT调控密切相关的赖氨酰氧化酶L2（Lysyl oxidase L2,LOXL2）分子表达和Wnt/β-catenin信号通路的变化。（2）构建裸鼠二次移植瘤模型:5周龄雄性BALB/c裸鼠15只,皮下注射MHCC97H细胞进行实验,接种细胞量为1×10~7/0.2mL/只,1周后,随机分为对照组、瑞戈非尼组、瑞戈非尼+健脾养阴解毒方组（n=5/组）进行相应药物干预,干预剂量及时间同上。4周后取各组裸鼠皮下瘤,用胶原酶/透明质酸酶消化分离HCC细胞,用无血清培养基调整细胞密度,按照原分组分别注射到新一批裸鼠腹侧皮下,每组包含浓度为10~5、10~4或10~3个细胞,每个浓度6个注射点。8周后观察成瘤情况。2.体外实验:SD大鼠12只,适应性饲养1周后随机分为空白组和给药组。健脾养阴解毒方用药剂量按照成人和大鼠体表面积等效剂量计算,大鼠用药量为12.24g/kg。中药加水煎煮至4.896g/mL,每只灌胃0.5mL,每天2次,连续3天。获取大鼠对照血清和含药血清。采用CCK-8实验检测瑞戈非尼、瑞戈非尼联合含药血清对肝癌细胞MHCC97H、HepG2的增殖能力的影响,用细胞划痕愈合实验以及Transwell实验检测肝癌细胞的迁移能力。用Real-Time PCR、Western blot检测细胞EMT标记分子E-cadherin、Vimentin的表达变化。结果:1.体内实验:（1）瑞戈非尼（R）、健脾养阴解毒方（J）、联合用药（R+J）干预均可改善肝癌裸鼠的一般情况,联合用药优于单独用药。三种干预方式均能抑制HCC原位瘤生长,瑞戈非尼的抑瘤率较健脾养阴解毒方低,联合用药抑瘤效果最佳。（2）健脾养阴解毒方、瑞戈非尼、联合用药均可抑制肝癌裸鼠肺转移,联合用药组肺转移率低于瑞戈非尼组。（3）Real-Time PCR、Western blot和免疫组化实验结果显示,瑞戈非尼干预后残余癌组织E-cadherin表达下调,Vimentin、LOXL2、active-β-catenin表达上调。健脾养阴解毒方、联合用药组残余HCC组织中E-cadherin表达增加,Vimentin、LOXL2、active-β-catenin表达下降。（4）瑞戈非尼干预后残余HCC细胞二次种植后成瘤率高于对照组,联合用药组裸鼠成瘤数少于瑞戈非尼及对照组。2.体外实验（1）获得健脾养阴解毒方含药血清及对照血清,并通过CCK-8实验结果筛选确定10%对照血清、10%含药血清以及1μM瑞戈非尼作为后续用药浓度。（2）小剂量瑞戈非尼长期干预促进HCC细胞的迁移,而联合含药血清显著抑制细胞迁移作用。（3）Real-Time PCR、Western blot结果显示瑞戈非尼干预后HCC细胞E-cadherin表达下调,Vimentin表达增加,联合用药可抑制E-cadherin和Vimentin的表达变化。结论:长期暴露于小剂量的瑞戈非尼可导致残余瘤组织中HCC细胞发生EMT,增加HCC细胞转移、成瘤能力。健脾养阴解毒方联合瑞戈非尼能够通过抑制HCC细胞LOXL2表达及Wnt/β-catenin通路的活化抑制EMT,抑制HCC细胞转移、成瘤能力,从而更有效地抑制肝癌裸鼠原位瘤生长、肝癌肺转移及肿瘤复发。