【摘 要】
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随着后基因组时代的到来,人类将克隆到越来越多的、生物学意义明确的功能基因,并借助基因工程手段用于生物体的遗传改良中。但生物体的绝大多数性状和生理功能都是依靠多功能
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随着后基因组时代的到来,人类将克隆到越来越多的、生物学意义明确的功能基因,并借助基因工程手段用于生物体的遗传改良中。但生物体的绝大多数性状和生理功能都是依靠多功能基因的协调表达而实现的。因此,多基因共表达策略将成为今后基因工程在理论与实际应用研究中的主流方向。构建多顺反子表达载体,研究原核生物多顺反子不同间隔区对外源基因表达效率的影响,将对多基因共表达具有一定的指导意义。目前,原核生物间隔区对外源基因表达效率的定量分析尚无报导。本研究拟从大肠杆菌基因组序列出发,对其多顺反子间隔区序列进行分析,选取间隔序列TAAATG,TAATG加以研究。在大肠杆菌中构建以绿色荧光蛋白为报告基因的双顺反子表达载体pET32a-Trx-GFPD(间隔序列为TAAATG),pET32a-Trx-GFPL(间隔序列为TAATG)及pET32a-Trx-GFPR(无间隔序列),同时构建对照质粒pET32a-GFP和pET32a-Trx。将上述质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,加入IPTG进行诱导表达,利用荧光分光光度计对GFP的表达进行荧光检测,结果表明pET32a-GFP表达产物的平均荧光强度为970.35,pET32a-Trx-GFPR为762.82,pET32a-Trx-GFPL为12.974,pET32a-Trx-GFPD为11.810,而pET32a-Trx仅为4.4168。这表明双顺反子间的间隔序列对报告基因表达有一定的影响,这为实现不同功能基因表达的精确调控奠定了基础。
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