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目的:观察白三烯受体拮抗剂孟鲁司特对CCI大鼠神经病理性疼痛的影响及相关机制。 方法:SD雄性大鼠(250±50g)36只,随机分为6组(n=6):正常对照组(N);假手术组(Sham);CCI模型组(CCI);孟鲁司特低剂量组(L);孟鲁司特中剂量组(M);孟鲁司特高剂量组(H)。通过CCI法制备神经病理性疼痛模型,孟鲁司特低、中、高剂量组大鼠术后每天分别腹腔注射0.5、1、2 mg/kg的孟鲁司特溶液;其余各组分别腹腔注射等体积的溶媒;共给药14天。各组大鼠在CCI术前1天,术后1、3、5、7、14天,分别用VonFrey法和Hargreaves法测量机械刺激缩足反射阈值(MWT)和和热缩足潜伏期(TWL)。采用ELISA法检测脊髓L4-6段匀浆液中IL-1β、IL-6以及TNF-α的表达水平,利用免疫荧光单标法检测Iba1的表达,通过免疫印迹方法检测脊髓L4-6匀浆液中磷酸化p38 MAPK和NF-κB p65的表达,通过免疫组化技术检测脊髓L4-6段NF-κB p65的表达,并且利用免疫荧光双标法检测Iba1和磷酸化p38、Iba1和NF-κB的表达情况。 结果:1.孟鲁司特对CCI大鼠机械刺激缩足反射阈值(MWT)和和热缩足潜伏期(TWL)的影响各组大鼠在术前1天MWT和TWL均无显著性差异。术后1天、3天、5天、7天和14天,MWT和TWL值均显著降低(P<0.05)。而孟鲁司特低、中、高剂量均不同程度地抑制了CCI手术导致的MWT和TWL降低。 2.孟鲁司特对CCI大鼠脊髓匀浆液中IL-1β,IL-6和TNF-α水平的影响CCI组大鼠的IL-1β、IL-6以及TNF-α分别为2880.39±1234.61、6606.73±2421.42、2880.39±1234.61(pg/mg tissue),明显高于假手术组(P<0.05);而孟鲁司特低、中、高剂量组的IL-1β,IL-6以及TNF-α的含量均显著低于CCI组(P<0.05)。 3.孟鲁司特对CCI大鼠脊髓背角小胶质细胞Iba1表达的影响免疫荧光化学检测发现:与假手术组相比,CCI模型组大鼠脊髓背角Iba1的表达显著增强,小胶质细胞活化的数量显著增加,细胞体积明显增大;而低、中、高剂量的孟鲁司特均不同程度地抑制了脊髓背角小胶质细胞Iba1的表达和活化。 4.免疫印迹检测孟鲁司特对CCI大鼠脊髓p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的影响免疫印迹结果显示:p-p38 MAPK在各组中都有表达,与假手术组相比较,CCI组p-p38 MAPK蛋白的表达明显增高(P<0.01);与CCI组比,孟鲁司特的低、中、高剂量组p-p38 MAPK蛋白的表达均显著降低(P<0.05),分别为CCI组的66.0%、70.3%、53.3%。另外,细胞核NF-κB p65蛋白在各组中都有表达,与假手术组相比较,CCI组NF-κB p65蛋白在细胞核中的表达明显增高(P<0.01);与CCI组比,孟鲁司特的低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白的表达均显著降低(均P<0.01),分别为CCI组的50.5%、41.0%、36.6%。 5.免疫组化检测孟鲁司特对CCI大鼠脊髓背角NF-κB p65表达的影响免疫组化染色显示:NF-κB p65在脊髓胞浆中和胞核中均有表达,与假手术组相比,CCI模型组大鼠脊髓细胞核NF-κB p65的表达显著增多,而孟鲁司特的低、中、高剂量组NF-κB p65蛋白的核转位均显著减少。 6.孟鲁司特对CCI大鼠脊髓背角小胶质细胞p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化的影响免疫荧光化学双标检测发现:CCI手术后14天,模型组Iba1(红染)和p-p38 MAPK(绿染)双阳性细胞数量显著增多,并且Iba1(红染)和NF-κB p65(绿染)双阳性细胞数量也明显增多;而孟鲁司特的低、中、高剂量组小胶质细胞p38MAPK的磷酸化和NF-κB p65蛋白的表达均显著降低。 结论:孟鲁司特能够显著抑制CCI大鼠脊髓背角小胶质细胞p38 MAPK磷酸化和NF-κB p65活化,减少促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的分泌,从而发挥拮抗CCI大鼠神经病理性疼痛的效应。