目的:白芍具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗的功效。临床用于治疗头痛眩晕、胁痛、腹痛、四肢挛痛,血虚萎黄,月经不调,自汗,盗汗等症。注射用白芍总苷是由白芍药材的有效部位—白芍总苷制备而成的。白芍总苷具有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗肝损伤和免疫性肝纤维化等多种药理作用。为提高白芍总苷的提取率和药材利用率,本研究采用单因素考察结合正交试验法优化了白芍总苷的提取工艺,采用柱层析技术进行分离、纯化,制得纯度较高的白芍总苷半成品;结合粉针剂的特点,进行了处方设计和制剂工艺优选,制成了白芍总苷冻干粉。方法:1含量测定方法研究采用HPLC法,建立白芍总苷和芍药苷的含量测定方法,并进行了方法学研究。2提取、分离、纯化工艺研究以白芍总苷和芍药苷的含量为考察指标,通过单因素提取溶媒考察,优选出最佳提取溶媒;采用四因素三水平正交试验设计优选白芍总苷的提取工艺,并结合实际生产情况进行提取工艺的验证试验,通过验证实验,确定白芍总苷提取工艺。比较了1:1、1:2、1:3、1:4四种不同比例的水沉条件对芍药苷、白芍总苷、干膏收率的影响,同时考察水沉时间,最终确定最佳水沉条件。采用大孔吸附树脂对白芍总苷进行分离与纯化。通过分别采用静态吸附和动态吸附的方法对不同型号不同厂家的大孔吸附树脂的考察,筛选出适合分离纯化白芍总苷的大孔吸附树脂,并对影响大孔吸附树脂吸附量和洗脱率的影响因素:上柱药液的pH值,药液的浓度,柱径/柱高的比例,洗脱乙醇浓度,洗脱溶剂用量,上样流速考察,最大上样量及洗脱流速考察进行了考察,最终确定了采用大孔吸附树脂分离纯化白芍总苷的工艺条件。通过比较了改良明胶法、醇溶液调pH值法、聚酰胺吸附法三种除鞣质的方法,确定本处方采用的除鞣质方法。3注射用白芍总苷成型工艺研究通过对甘露醇、葡萄糖、氯化钠、乳糖不同骨架剂和药液直接冻干的考察,确定白芍总苷冻干粉针剂的处方。并对影响冻干粉质量的药液的pH值、除热原的方法、药液冻干时的浓度以及灭菌工艺分别进行考察,最终确定冷冻干燥工艺。结果:1建立了HPLC法测定白芍总苷和芍药苷含量测定方法1.1 HPLC法测定白芍总苷含量色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸(25:75)为流动相,检测波长:230nm,流速:1ml/min。理论塔板数按苯甲酸峰计算不得低于4000。对照品溶液的制备:精密称取苯甲酸对照品适量,加水制成每1ml含苯甲酸10μg的溶液,即得。供试品溶液的制备:精密吸取白芍提取液(约相当于0.2g药材),置蒸发皿中蒸干,残渣加1%NaOH溶液10ml溶解,精密量取0.5ml置10ml量瓶中,加乙腈-0.1%磷酸(25:75)8ml,摇匀,再加1mol/L的盐酸溶液调pH值3-6,用乙腈-0.1%磷酸(25:75)定容至刻度,摇匀,即得。测定法:吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。计算方法:白芍总苷含量(mg)=苯甲酸含量(mg)×480.27/122.12 1.2 HPLC法测定芍药苷含量色谱条件与系统适应性试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.1%磷酸(14:86)为流动相,检测波长:230nm,流速:1ml/min。理论塔板数按芍药苷峰计算不得低于3000。对照品溶液的制备:精密称取芍药苷对照品适量,加甲醇制成每1ml含芍药苷60μg的溶液,即得。供试品溶液的制备:精密吸取提取液(约相当于0.1g药材),置50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。测定法:吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。2提取、分离、纯化工艺研究结果2.1提取工艺考察结果通过单因素考察和正交试验优选出白芍总苷提取工艺为:加70%乙醇,10倍量,提取2次,每次2h。通过水沉比例与水沉时间考察,确定水沉工艺条件为:将药液浓缩至1ml药液含1g生药,药液与水比例为1:2,4℃以下水沉72小时。2.2分离、纯化工艺考察结果通过采用静态吸附和动态吸附的方法筛选出HPD300大孔吸附树脂分离纯化白芍总苷,其吸附量和洗脱率均高于其它树脂。采用HPD300大孔树脂纯化白芍总苷的工艺通过考察确定为:药液加7倍量水稀释成每1ml药液含0.1g生药,以4BV/h流速通过HPD300大孔吸附树脂柱(树脂柱径高比为1:11),先5倍柱体积水洗,继以7倍柱体积50%乙醇洗脱,洗脱流速为4BV/h,收集洗脱液,备用。3注射用白芍总苷成型工艺研究结果通过注射用白芍总苷成型工艺研究,初步确定了冻干工艺流程:取药液分装到西林瓶中,与冻干机样品架一起放低温冰箱中预冻:-40℃,12小时;样品放置冻干机中冻干,24小时后样品冻干完成,取出样品,盖胶塞,封铝盖,即得。结果产品外观均匀疏松,含水量小于3%,说明该工艺稳定可行。结论:研究结果表明,对白芍采用合理的提取、分离、纯化工艺,可得到含量大于80%的白芍总苷,且芍药苷的含量大于50%;按冻干粉的要求可以制成白芍总苷冻干粉针剂。