【摘 要】
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目的:肝细胞癌是世界上第六大常见癌症,也是癌症相关死亡率的第三大原因。作为最常见的一类原发性肝癌,关于其诊断与治疗一直以来都备受人们关注与重视。而在肝癌所引起的肝细胞氧化损伤中,谷胱甘肽(GSH)作为主要的抗氧化剂,在保护细胞免受氧化损伤过程中发挥着重要作用。谷胱甘肽(GSH)是人体内含量最丰富的生物硫醇,除此之外,在人体中还有半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)这两种生物硫醇,但因这三种生
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目的:肝细胞癌是世界上第六大常见癌症,也是癌症相关死亡率的第三大原因。作为最常见的一类原发性肝癌,关于其诊断与治疗一直以来都备受人们关注与重视。而在肝癌所引起的肝细胞氧化损伤中,谷胱甘肽(GSH)作为主要的抗氧化剂,在保护细胞免受氧化损伤过程中发挥着重要作用。谷胱甘肽(GSH)是人体内含量最丰富的生物硫醇,除此之外,在人体中还有半胱氨酸(Cys)、同型半胱氨酸(Hcy)这两种生物硫醇,但因这三种生物硫醇在结构上的相似性,导致很难对三者进行有选择性地检测。近年来,基于香豆素及其衍生物所开发的荧光分子探针检测方法由于具有选择性高、灵敏度高、肉眼可见、高生物相容性、高量子产率、低检测限、操作简单、成本低等特点而引起了广泛关注,成为生物学分析、有机物合成与代谢、临床诊断的重要手段之一。为了从GSH、Cys与Hcy中对GSH进行选择性检测,我们团队合成了一种基于香豆素的新型“开启式”荧光探针。方法:我们以香豆素作为荧光核心开发出探针4-BrCP,通过一系列光谱测量方法,分别对其选择性、灵敏度、最低检测限、抗干扰性能、p H范围、光稳定性等一系列性能进行检测,随后通过细胞毒性(CCK-8)试验验证4-BrCP的细胞毒性,通过活Hep G2细胞以及秀丽隐杆线虫和斑马鱼等对象验证4-BrCP在活细胞和生物体中的荧光成像性能以及4-BrCP的生物应用价值。结果:通过公式计算得出4-BrCP量子产率为0.84。经过一系列荧光光谱试验,证明了4-BrCP能在GSH、Cys、Hcy三者共存的环境下有选择性地与GSH进行反应,其在λ=495nm处有最大荧光发射强度。反应开始后,峰值发射强度的增长速度在大约12分钟后开始明显放缓,并且从大约23分钟开始,其荧光强度开始逐渐趋于稳定,达到平台期。通过GSH滴定试验,得出4-BrCP的最低检测限约为9.8n M。探针在生理p H环境下较为稳定,可以在5-8这一p H范围内与GSH进行反应,并且证明了即使在不同p H环境中进行反应,该探针均表现出了良好的光稳定性。此外,通过抗干扰试验验证了该探针在复杂的生物体系统中仍旧可以高选择性地检测GSH并与其充分反应,而不会受到其他常见干扰因素的影响。最后,通过CCK-8试验成功验证4-BrCP具有低细胞毒性,通过活Hep G2细胞、以及秀丽隐杆线虫和斑马鱼等荧光成像试验证实了4-BrCP的生物荧光成像能力。结论:我们设计并合成了一种新型的“开启”式香豆素荧光探针4-BrCP。该探针具有高选择性、优异的灵敏度、杰出的抗干扰性能、良好的光稳定性、低细胞毒性、理想的生物荧光成像效果等一系列特点。鉴于探针4-BrCP的上述良好性能,我们认为4-BrCP将极大地促进包括肝细胞性肝癌在内的GSH相关疾病的早期诊断筛查或基础研究的调查,更好地应用于包括肝细胞性肝癌在内的疾病预后和诊断相关生物标志物的传感监测,并进一步设计开发以4-BrCP为支架的荧光探针药物靶向递送系统。
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