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干燥综合征(Sj?gren’s syndrome, SS)是一种主要累及唾液腺和泪腺等外分泌腺的慢性、炎症性自身免疫病。临床上除眼干、口干等主要症状外,患者还出现明显的免疫功能异常,如受累腺体 T 淋巴细胞浸润、CD4+/CD8+T 细胞比值异常及外周血中高水平的自身抗体等。目前本病的发病原因及确切发病机理不明,随着现代医学技术的不断发展,人们对它的认识亦不断深入,其发病的细胞免疫机理一直是学者们研究的热点。 由于病因未明,西医治疗本病主要以替代疗法为主,不能从根本上进行治疗。中医药由于其可以对机体的免疫系统进行整体调节,有效防治并发症,有较稳定的远期疗效,价格低廉等优点,在临床治疗本病中发挥出了很大的优势。 生津口服液是我校东直门医院口腔科治疗干燥综合征的有效方剂,为了进一步探讨干燥综合征的免疫发病机理,阐明生津口服液的免疫治疗作用,为其临床应用提供更有力的实验依据,我们进行了以下的实验研究:1、制备了干燥综合征大鼠和小鼠模型。2、观察了生津口服液对 SS 模型鼠颌下腺病理形态学改变、颌下腺指数、唾液分泌量及血清特异性抗体水平的影响。3、检测了生津口服液对SS 模型鼠 T、B 淋巴细胞增殖,DTH 反应等免疫功能的影响。4、用 RT-PCR 和 ELISA的方法检测了生津口服液对 SS 模型小鼠颌下腺中浸润 Th1 及 Th2 样细胞因子的影响。5、生津口服液对 SS 模型鼠体重、进食量、饮水量的影响。实验结果如下:1 干燥综合征大鼠及小鼠模型的复制及其病变表现: 采用免疫学方法,将用差速离心法在 100,000g 下所提取的大鼠颌下腺抗原组分作为免疫用抗原,注射至大鼠两后足的足趾部及小鼠的两后脚掌和两侧腹股沟皮下,并多次腹腔注射百日咳杆菌加强免疫,大鼠于免疫 20 天后、小鼠于免疫90 天后处死。1.1 SS 大鼠模型的病变表现:造模结束时对其进行各项指标检测:(1)称取颌下腺重量,计算颌下腺指数,发现 SS 模型大鼠颌下腺指数较正常组显著增大。(2)颌下腺病理学检查表现为颌下腺出现间质、腺管、血管周围淋巴细胞浸润,导管扩张等病变。(3)在造模过程中动态观察其唾液分泌量的变化,发现 SS 模型大鼠从造模第 10 天起唾液分泌量较正常组明显减少,一直持续至造模结束。说明 SS模型大鼠口干症状明显。(4)造模过程中多次取血进行血清特异抗体的 ELISA 检测,发现模型组大鼠的血清特异抗体效价逐渐增高,在造模结束时与佐剂组相比有统计学意义。1.2 SS 小鼠模型的病变表现:造模结束时对其进行各项指标检测:(1)计算颌下腺指数,发现 SS 模型小鼠颌下腺指数减小,与正常组相比有显著统计学差异。(2)病理学检查发现 SS 模型小鼠颌下腺中出现间质、血管周围、导管壁中有中度淋巴<WP=4>II 生津口服液对干燥综合征模型鼠治疗机理的初步研究细胞浸润,腺泡大小不等,部分已破坏、消失,纤维增生等病变后期腺体萎缩、纤维化的表现。(3)在造模过程中动态观察其唾液分泌量的变化,发现 SS 模型小鼠从造模第 15 天起唾液分泌量较正常组明显减少,一直持续至造模结束。(4)造模不同时期取血进行血清特异抗体的 ELISA 检测,结果表明第 40 天时 SS 模型小鼠血清特异抗体水平与正常组相比升高,有显著差异,以后一直维持于该水平至造模结束。 以上实验结果说明本研究建立的 SS 大鼠模型和小鼠模型出现了与临床患者相似的颌下腺淋巴细胞浸润,腺体损伤、唾液分泌功能受损,自身抗原诱导的特异性抗体水平增高等特异性病变,可以部分地模拟 SS 患者的临床病变。2 生津口服液对 SS 模型鼠有良好的治疗作用:2.1 生津口服液对模型鼠特异性病变的改善:2.1.1 减轻 SS 模型鼠颌下腺的病理学改变:颌下腺病理学观察发现用药组大鼠仅见间质中少量淋巴细胞浸润,腺泡大小不一,未见腺体破坏。用药组小鼠与 SS模型小鼠颌下腺腺体萎缩、纤维化等病理改变相比仅出现腺体中少量淋巴细胞浸润,未见腺体破坏和纤维增生。2.1.2 对 SS 模型鼠颌下腺指数的影响:实验结果表明,用药组大鼠颌下腺指数较模型组明显减小;用药组小鼠的颌下腺指数较模型组明显增大。说明生津口服液可以通过减轻 SS 模型大鼠颌下腺的炎症肿胀,及防止 SS 模型小鼠颌下腺的萎缩,从而减轻 SS 模型鼠颌下腺腺体的损伤。2.1.3 改善 SS 模型鼠颌下腺分泌唾液的功能:通过动态测定动物的唾液分泌量,发现用药组大鼠和小鼠的唾液分泌量均较模型组增多,说明生津口服液可以缓解SS 模型动物的口干症状。2.1.4 降低 SS 模型鼠血清特异抗体水平:采用 ELISA 技术测定血清特异抗体水平发现,用药组大鼠和小鼠的血清特异抗体水平均较模型组明显降低。2.2 生津口服液可以抑制 SS 模型鼠机体亢进的免疫功能:2.2.1 抑制 SS 模型鼠免疫器官指数的增大: 在造模结束时,检测模型大鼠和模型小鼠的脾指数及胸腺指数,结果显示:SS 模型大鼠和小鼠均表现出脾和胸腺的增大,治疗组动物的脾指数和胸腺指数均较模型组减小,接近正常组水平。2.2.2 抑制 SS 模型鼠 T、B 细胞增殖能力: 采用 MTT 法测定实验鼠脾及胸腺 T、B 细胞的增殖能力,结果表明:生津口服液可以明显