电针人中穴作用于长链非编码RNA调控MCAO大鼠炎症反应的实验研究

来源 :天津中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:bavai
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目的:筛选MCAO后调控炎症反应的关键lnc RNA,初步探索针刺作用于lnc RNA调控炎症反应的作用规律。方法:体重为(220?10)g的健康雄性Wistar大鼠90只,随机分为假手术组(n=30),模型组(n=30),针刺组(n=30)。每组大鼠术后分为3h、6h、12h、3d、7d共5个时相,每时相各6只。模型组和针刺组通过改良线栓法建立永久性右侧MCAO模型,假手术组仅钝性分离血管,不结扎亦不插线。针刺组大鼠造模成功后即刻行针刺干预,大鼠人中穴定位参照《常用动物腧穴图谱》(华兴邦主编)。用0.25*13s毫针在大鼠鼻中隔上方向上斜刺2mm,并在其下方2mm处另刺一针作为参考电极,接通电针仪,15Hz刺激强度持续针刺20min,每日1次,3h、6h、12h时相者仅针刺1次,3d、7d时相者分别针刺3次、7次。模型组和假手术组不进行任何干预治疗,但需用与针刺组同样的方式抓取固定。参照NSS评分标准,于术前、术后及取材前对各组各时相大鼠进行评分。取材后,微阵列技术检测脑卒中后缺血灶及周围区域大脑皮质lnc RNA表达水平;RT-PCR验证脑梗塞后大脑皮质差异表达lnc RNA水平及针刺干预效应;生物信息学技术筛选差异表达lnc RNA中炎症相关性lnc RNA,并初步探索其作用规律。结果:1.针刺干预对MCAO大鼠NSS评分的影响:假手术组在3h、6h、12h、3d、7d各时相的NSS评分均为0;模型组在五个时相的NSS评分分别为12.0?0.9、11.5?1.0、10.8?0.8、8.2?1.2、6.5?1.4;针刺组在五个时相的NSS评分分别为11.7?0.8、11.2?1.0、10.2?1.2、7.0?1.1、5.0?1.1。模型组和针刺组在3h时NSS评分均最高,之后均随着缺血时间的延长逐渐下降。与假手术组相比,模型组大鼠NSS评分在各时相与其差异均非常显著(P(27)0.01),有统计学意义。与模型组相比,针刺组大鼠NSS评分在各时相均低于同时相模型组,且随着时间的延长,评分差距逐渐增大,在3d、7d时差异有统计学意义(P(27)0.05)。2.缺血缺氧刺激对MCAO大鼠炎性基因表达的影响:MCAO 3h、12h、3d后,表达发生变化的直接调控炎症反应的基因分别为32个、156个、255个,总计275个;表达发生变化的IL相关基因分别为25个、116个、219个,总计234个;表达发生变化的TNF-α相关基因分别为27个、88个、153个,总计168个;表达发生变化的TGF-β相关基因分别为11个、43个、73个,总计79个;表达发生变化的炎性细胞趋化性相关基因分别为13个、49个、81个,总计85个;表达发生变化的TLRs途径相关基因分别为5个、20个、45个,总计45个;表达发生变化的MAPKs途径相关基因分别为33个、150个、253个,总计280个;表达发生变化的NF-κB途径相关基因分别为24个、80个、134个,总计152个。3.针刺干预对MCAO大鼠炎性基因的影响:MCAO 3h、12h、3d后,表达发生变化的直接调控炎症反应的基因分别为0个、12个、12个,总计23个;表达发生变化的IL相关基因分别为0个、0个、8个,总计8个;表达发生变化的TNF-α相关基因分别为0个、9个、5个,总计13个;表达发生变化的TGF-β相关基因分别为0个、6个、5个,总计11个;表达发生变化的炎性细胞趋化性相关基因分别为0个、7个、4个,总计9个;表达发生变化的MAPKs途径相关基因分别为0个、14个、23个,总计37个;TLRs途径及NF-κB途径相关基因的表达未发生变化。4.针刺干预MCAO大鼠12h后发挥炎症调控作用的lnc RNA主要有:NONRATT019464.2、NONRATT023757.2、NONRATT023759.2、NONRATT008294.2、NONRATT033972.1,其作用的发挥与中性粒细胞趋化、MAPK级联反应正调控、TNF-α密切相关。针刺干预MCAO大鼠3d后发挥炎症调控作用的lnc RNA主要有:NONRATT005619.2、NONRATT005620.2、MSTRG.18220.1、NONRATT014885.2、NONRATT014886.2、NONRATT014888.2、NONRATT014889.2、NONRATT005333.2、NONRATT005334.2,其作用的发挥与TGF-β、单核细胞趋化、MAPK级联反应密切相关。结论:1.脑梗塞早期体内炎症基因表达早于炎症症状出现时间,且随着时间的延长炎症相关性基因表达数量逐渐上升。2.针刺调控炎症相关性基因表达具有两个特征:一是基因表达的不一致性。针刺除对模型组存在的炎性相关基因产生调控外,还可刺激某些模型组不表达的“新”基因表达。二是炎症因子出现时间的不一致性。针刺对不同类型炎症因子的调控作用在时间上存在差异,对TNF-α、TGF-β、细胞趋化性、MAPKs相关基因的调控在MCAO 12小时后出现,对IL相关基因的调控在MCAO 3天后出现,对TLRs、NF-κB相关基因的调控在MCAO 3天时仍未出现。3.针刺人中穴可能通过lnc RNA NONRATT019464.2、NONRATT023757.2、NONRATT023759.2、NONRATT008294.2、NONRATT033972.1、NONRATT005619.2、NONRATT005620.2、MSTRG.18220.1、NONRATT014885.2、NONRATT014886.2、NONRATT014888.2、NONRATT014889.2、NONRATT005333.2、NONRATT005334.2调控脑卒中后炎症反应,改善神经功能缺损症状,但它们的具体作用通路有待进一步研究。
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