目的:银屑病是一种由常驻皮肤细胞和免疫细胞交互对话形成炎症环路的复杂的自身免疫性皮肤病。在银屑病发展进程中,中性粒细胞被召集到皮损处并释放出中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）。IL-36家族细胞因子,尤其是IL-36γ,是驱动银屑病炎症反应发生的关键因素。二苯乙烯苷（2,3,5,4-tetrahydroxy stilbene-2-O-β-D-glucoside,2354Glu）被猜想可能召集NETs对抗银屑病,但未得到验证。本实验旨在探究NETs在以IL-36γ过度分泌为特征的ex vivo模型中的表达及其可能调控机制、2354Glu在NETs耗竭时对银屑病的干预作用和在不同应用时间下小鼠对咪喹莫特（imiquimod,IMQ）应答情况。方法:1.建立银屑病样皮肤炎症ex vivo模型。出生3天内的昆明乳鼠冷冻麻醉取相同大小的皮肤组织在体外进行培养。使用Poly（I:C）（25μg/m L）前一小时用Cl-amidine（200μM）、GSK 484（10μM）、DNase I（5μg/m L）预处理ex vivo组织,24 h后联合ATP（3 m M）处理30 min后收集上清液及皮肤组织。检测NETs的生成及IL-36γ、IL-36α、IL-36β、HMGB1等炎性细胞因子的表达。2.建立不同应用时间下小鼠对IMQ应答情况模型。将8～10周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分成5组,涂抹62.5 mg 5%咪喹莫特乳膏的天数分别为0、2、4、6、8天,收集皮肤、血清、肝脏、脾脏等。通过免疫组织化学染色标记keratin 1、keratin 14、keratin 17和PCNA的表达;利用蛋白印迹法、RT-q PCR、免疫荧光等检测皮肤中IL-36γ、HMGB1等蛋白或m RNA的表达;用ELISA法测定小鼠血清中产生的髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）-DNA复合物的表达情况。3.建立NETs耗竭时2354Glu干预小鼠银屑病炎症模型。将8～10周龄的C57BL/6雄性小鼠随机分为6组,分别为正常组、IMQ组、IMQ+100 mg/kg 2354Glu组、IMQ+25 mg/kg 2354Glu组、IMQ+25 mg/kg 2354Glu+10 mg/kg Cl-amidine组、IMQ+10 mg/kg Cl-amidine组。每日早上9点腹腔注射2354Glu（100 mg/kg、25mg/kg）或皮下注射10 mg/kg Cl-amidine连续8天,自第5天起涂抹62.5 mg 5%咪喹莫特乳膏,第9天收集皮肤、血清。通过ELISA检测血清中IL-36γ、MPODNA复合物的表达;通过免疫组织化学染色标记小鼠皮肤中keratin 1、keratin 17和PCNA的表达;利用蛋白印迹法、RT-q PCR、免疫荧光等检测皮肤中IL-36γ、IL-36β等蛋白或m RNA的表达。结果:1.Poly（I:C）/ATP诱导ex vivo模型中IL-36γ及NETs的过度分泌。Cl-amidine、GSK 484、DNase I将在不同程度上抑制ex vivo模型中NETs的形成、减少炎症因子HMGB1、IL-36γ等产生、减少MPO、F4/80在皮肤中的浸润。2.咪喹莫特诱导下,小鼠背部皮肤增厚并产生鳞屑及红斑。IL-36γ、IL-36β、IL-36α、HMGB1等炎症细胞因子在咪喹莫特诱导下逐步富集在银屑病皮损处。同时,中性粒细胞、巨噬细胞在咪喹莫特诱导下被激活并逐步向表皮层迁移形成中性粒细胞微脓肿。咪喹莫特刺激角质形成细胞发生过度增殖和异常分化。且上述现象在一周后减轻。3.2354Glu改善咪喹莫特诱导产生的鳞屑、红斑,抑制银屑病样皮肤炎症中IL-36家族细胞因子的表达、改善角化不全标志物keratin 1、过度角化标志物keratin 14、异常增殖标记物PCNA的表达。而耗竭NETs加重了银屑病样皮肤表征、上调IL-36、TNF-α等炎症细胞因子的表达、加重角质形成细胞的异常分化与增殖。结论:Poly（I:C）作为ds RNA识别TLR3,与ATP联合诱导ex vivo模型中IL-36γ、NETs的分泌;NETs调控ex vivo模型中IL-36γ、IL-1β、HMGB1等炎症细胞因子的分泌;NETs通过调控炎症因子的分泌改善ex vivo模型中免疫细胞的浸润;咪喹莫特刺激角质形成细胞异常分化和增殖,诱导中性粒细胞、巨噬细胞在银屑病皮损中浸润;咪喹莫特对小鼠IL-36γ、HMGB1等炎症细胞因子的诱导作用只能维持一周,使其应用受到限制;低剂量2354Glu对银屑病的保护作用依赖于NETs,在此过程中NETs有积极且有益的作用。