枸杞多糖灌胃联合骨髓间充质干细胞移植对薄型子宫内膜大鼠的影响

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目的:本研究选择枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,以下简称LBP)灌胃与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,以下简称BMSC)移植技术相结合,对薄型子宫内膜大鼠模型进行干预。干预后观察两者联合对子宫内膜修复的作用,揭示其对增加子宫内膜厚度,改善内膜容受性等相应指标中的作用,初步探讨其促进损伤修复的作用机制,最终希望通过本课题研究,为中医饮食调护理论与临床护理健康宣教提供有来源的科学指导,为药食同源类物质在女性辅助生殖领域的理论与方法提供创新性的研究思路。方法:将具有正常动情周期的35只SPF级成年SD雌性大鼠随机分为5组,分别为对照组、模型组、BMSC组、LBP组、联合组,每组7只,除对照组采用生理盐水造模外,其余4组大鼠均采用95%乙醇宫腔注射法建立薄型子宫内膜模型;除BMSC组、联合组宫腔注射BMSC移植液外,其余各组均于造模后于宫腔内注射生理盐水;除LBP组和联合组灌胃LBP外,其余组均灌胃生理盐水。干预14d后,观察两个动情周期后取材(大鼠子宫)。HE染色检测各组大鼠子宫内膜组织结构、厚度变化、血管数目及腺体数目;免疫组化法检测子宫内膜波形蛋白、角蛋白及整合素αvβ3的表达;Western-blotting法检测大鼠子宫内膜上血管内皮生长因子、白血病抑制因子、内皮素受体A的蛋白表达。结果:1.模型建立:薄型子宫内膜建模成功,形态学上,对照组子宫内膜结构完整,模型组子宫内膜厚度明显降低,内膜连续性破坏,皱褶减少,显微镜下观察腺上皮及内膜上皮细胞多呈低柱状或可呈现扁平状;间质可见纤维组织增生,腺体稀疏,可见部分腺体腺上皮萎缩;模型组的平均内膜厚度较对照组内膜厚度薄(P<0.05)。2.细胞结果:通过BMSC培养、鉴定、计数及传代技术,培养出符合细胞表型特征、数量足够、具有良好分化潜能的BMSC。3.HE染色结果:与对照组相比,模型组内膜变薄(P<0.05),与模型组相比,BMSC组、LBP组和联合组内膜增厚(P<0.05);与对照组相比,模型组大鼠子宫内膜血管数量减少(P<0.05),与模型组相比,BMSC组、LBP组和联合组血管数量增加(P<0.05);与对照组相比,模型组腺体数目减少,与模型组相比,BMSC组、LBP组和联合组腺体数目增多(P<0.05)。4.免疫组化结果:与对照组相比,模型组子宫内膜波形蛋白、角蛋白及整合素α v β 3的MOD值降低(P<0.05),与模型组相比,BMSC组、LBP组和联合组波形蛋白、角蛋白、整合素α v β 3的MOD值增高(P<0.05)。5.Western blot结果:与对照组相比,模型组子宫内膜血管内皮生长因子、白血病抑制因子、内皮素受体A的MOD值均显著降低(P<0.05),与模型组相比,BMSC组、LBP组和联合组MOD升高(P<0.05)。结论:本研究成功建立符合临床表型特征的薄型子宫内膜大鼠模型,培养了符合细胞表型特征、数量足够、具有良好分化潜能的BMSC,且LBP灌胃联合BMSC移植技术联合使用对比单独使用其中任何一种效果更佳,可使薄型子宫内膜厚度增厚,有助于改善薄型子宫内膜大鼠的内膜容受性,说明枸杞多糖灌胃作为辅助干预的方法可发挥良好的作用,一方面有利于促进枸杞作为药食同源类中药的二次研发和应用,扩大研究空间,开阔应用前景,促进枸杞同类或其它药食同源类物质、食疗方、药膳方在解决临床问题中的进一步研究;另一方面使得临床护理过程中饮食方面的健康宣教具备更好的科学性、可信性及先进性,更好的发挥中医饮食调护理论在临床护理中的作用,以期进一步提高患者妊娠的成功率。
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