白念珠菌是念珠菌病原体中最常见的一种条件性致病菌,白念珠菌应答的-个主要环境因素为细胞外的pH,这种应答反应是由保守的真菌信号传导途径RIM101途径所控制,许多依赖pH表达的基因受转录因子Rim101蛋白所调控。从宿主中获得铁的能力对于白念珠菌的定居和存活是必需的。白念珠菌铁获得系统的调控对其生存和毒力非常重要,而细胞外的不同pH条件影响着铁离子的生物可利用率,因此推测铁获得系统受转录因子Rim101蛋白调控。 通过对白念珠菌高铁还原酶基因FRP1启动子进行突变分析,确认启动子中特殊调控元件。DNA微阵列结果显示FRP1表达受Rim101蛋白调控。我们通过分析FRP1起始密码子上游1K序列发现在-160和-650处有两个推测的Rim101p结合位点,对其分别进行定点突变,然后构建启动子与报告基因1acZ融合质粒,转化整合到白念珠菌,rim101-/-株和野生株中,检测不同缺铁条件下β-半乳糖苷酶活性。结果发现碱性条件,Rim101p能够正向调控FRP1的表达：启动子-160处突变对启动子功能影响较弱,而-650突变使启动子活性大大降低,此结果和双突变的结果相同,表明Rim101p主要通过与启动子-650处结合位点相互作用来调控FRP1的表达。 为了验证Rim101p是否直接结合GCCAAG位点,利用白念珠菌细胞总蛋白提取物进行EMSAs实验发现Rim101p能直接与-160和-650探针结合,不同的培养条件(pH)不影响结合。将全长Rim101p和截短Rim101p分别在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白EMSAs实验进一步验证Rim101p能直接结合GCCAAG位点。并且发现截短Rim101p只能与-650探针结合,说明截短(活性形式)Rim101p主要通过与启动子-650位点结合调控FRP1表达,这与启动子突变结果一致。 为了寻找FRP1上游-822～-437和-263～124片断中的特殊调控元件,本实验分别将片段与IMH3中性启动子连接,通过β-半乳糖苷酶活性的分析说明：-822～-437区域有促进启动子表达的元件,-650 Rim101p结合位点是起作用的重要元件； -263～-124含有FRP1基因的核心启动子元件,能极大促进启动子表达,-160位点突变不影响其作用。这些结果进一步验证启动子突变结果的正确性。