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乌饭树是一种极具开发价值的树种,我国拥有丰富的野生乌饭树植物资源,但是由于人为破坏及自身繁殖困难,导致乌饭树数量衰减,群落衰退。如何实现乌饭树种质资源的保护及人工栽培的扩大是当前亟需解决的问题。本研究以生长健壮的乌饭树无菌苗茎段为试验材料,通过组培技术,对乌饭树组织培养中芽增殖、不定根发生、组培苗移栽三个技术环节重要影响因子进行筛选,结合生长调节物质与生根相关氧化酶内在关系的探究,试图构建乌饭树组培不定芽增殖与不定根发生体系,为乌饭树幼苗工厂化高效生产提供技术支撑。本文主要研究成果如下:
1.芽增殖阶段,研究了基本培养基、生长素、细胞分裂素对乌饭树不定芽增殖的影响,并在此基础上,通过正交实验进一步优化激素配比。结果表明:以增殖系数、成枝率、芽高、生物量等为衡量指标,1/2MS培养基和改良WPM培养基增殖效果优于MS、B5、LM培养基;细胞分裂素ZT优于6-BA、TDZ、KT,并在1.0mg/L-2.0mg/L时诱导的不定芽、腋芽数量多,品质好;生长素NAA对乌饭树不定芽的增殖效果优于IAA和IBA。激素组合正交实验(ZT(0.5,1.0,1.5)、GA3 (0.5,1.0,2.0)、NAA(0, 0.1,0.2))(单位:mg/L)表明:ZT对不定芽增殖系数影响最大,NAA影响最小;GA3能够提高芽苗品质,综合考量,乌饭树不定芽增殖优化培养基为改良WPM+1.5mg/LZT+2.0mg/LGA3+0.1mg/LNAA,增殖系数最高达到4.72。
2.生根阶段,选择不同基本培养基、生长素种类及浓度进行单因素筛选,以平均根数、平均根长、有效生根率、最长根长度、单株根鲜重、单株根干重、根冠比等作为生根指标,结果显示1/2改良WPM培养基生根效果优于1/2MS、MS、B5培养基;单因素筛选中,NAA在质量浓度0.6mg/L-1.0mg/L时生根效果较好,IBA在质量浓度0.8mg/L-1.5mg/L时生根较好,整体上IBA生根效果优于NAA。进一步多因素筛选表明:NAA与IBA最优激素配比为:0.8mg/LIBA+0.3mg/LNAA。培养基、IBA、ZT正交实验筛选中,乌饭树生根对ZT敏感,添加ZT不利于生根;1/4改良WPM培养基生根效果与1/2改良WPM培养基生根效果相近,九种正交实验设计中,1/2改良WPM+1.0mg/LIBA生根效果最好,对比最优激素配比生根效果,确定乌饭树不定根发生最佳培养基配方为:1/2改良WPM+0.8mg/LIBA+0.3mg/LNAA,有效生根率达到100%,单株根鲜重97.22mg,根冠比可达2.79。
3.光周期是影响乌饭树生根的重要物理因素,对8h/d、12h/d、16h/d、暗培养7d转为12h/d、暗培养14d转为12h/d5种光照处理进行筛选,发现乌饭树组培生根最佳光照时长为16h/d,同时,适宜的暗处理有利于提高乌饭树生根效果。
4.氧化酶POD、SOD、IAAO的活性与不定根形成的激素配比联系密切,生根培养2个月后,叶片中POD与SOD活性越高,生根效果越好;激素配比对生根中后期叶片中IAAO活性影响较小,相对较高的IAAO活性生根效果反而较差。
5.组培苗移栽阶段,设置6种移栽基质研究乌饭树组培苗移栽成活率及生长状况。结果表明混合基质优于单一基质,其中以珍珠岩∶蛭石∶泥炭=1∶1∶2配比移栽效果最好,移栽成活率可以达到96.11%,同时根系活力、株高增长量、地径、新生叶片数、叶长,叶宽,光合色素含量等均可以达到优良状态。
1.芽增殖阶段,研究了基本培养基、生长素、细胞分裂素对乌饭树不定芽增殖的影响,并在此基础上,通过正交实验进一步优化激素配比。结果表明:以增殖系数、成枝率、芽高、生物量等为衡量指标,1/2MS培养基和改良WPM培养基增殖效果优于MS、B5、LM培养基;细胞分裂素ZT优于6-BA、TDZ、KT,并在1.0mg/L-2.0mg/L时诱导的不定芽、腋芽数量多,品质好;生长素NAA对乌饭树不定芽的增殖效果优于IAA和IBA。激素组合正交实验(ZT(0.5,1.0,1.5)、GA3 (0.5,1.0,2.0)、NAA(0, 0.1,0.2))(单位:mg/L)表明:ZT对不定芽增殖系数影响最大,NAA影响最小;GA3能够提高芽苗品质,综合考量,乌饭树不定芽增殖优化培养基为改良WPM+1.5mg/LZT+2.0mg/LGA3+0.1mg/LNAA,增殖系数最高达到4.72。
2.生根阶段,选择不同基本培养基、生长素种类及浓度进行单因素筛选,以平均根数、平均根长、有效生根率、最长根长度、单株根鲜重、单株根干重、根冠比等作为生根指标,结果显示1/2改良WPM培养基生根效果优于1/2MS、MS、B5培养基;单因素筛选中,NAA在质量浓度0.6mg/L-1.0mg/L时生根效果较好,IBA在质量浓度0.8mg/L-1.5mg/L时生根较好,整体上IBA生根效果优于NAA。进一步多因素筛选表明:NAA与IBA最优激素配比为:0.8mg/LIBA+0.3mg/LNAA。培养基、IBA、ZT正交实验筛选中,乌饭树生根对ZT敏感,添加ZT不利于生根;1/4改良WPM培养基生根效果与1/2改良WPM培养基生根效果相近,九种正交实验设计中,1/2改良WPM+1.0mg/LIBA生根效果最好,对比最优激素配比生根效果,确定乌饭树不定根发生最佳培养基配方为:1/2改良WPM+0.8mg/LIBA+0.3mg/LNAA,有效生根率达到100%,单株根鲜重97.22mg,根冠比可达2.79。
3.光周期是影响乌饭树生根的重要物理因素,对8h/d、12h/d、16h/d、暗培养7d转为12h/d、暗培养14d转为12h/d5种光照处理进行筛选,发现乌饭树组培生根最佳光照时长为16h/d,同时,适宜的暗处理有利于提高乌饭树生根效果。
4.氧化酶POD、SOD、IAAO的活性与不定根形成的激素配比联系密切,生根培养2个月后,叶片中POD与SOD活性越高,生根效果越好;激素配比对生根中后期叶片中IAAO活性影响较小,相对较高的IAAO活性生根效果反而较差。
5.组培苗移栽阶段,设置6种移栽基质研究乌饭树组培苗移栽成活率及生长状况。结果表明混合基质优于单一基质,其中以珍珠岩∶蛭石∶泥炭=1∶1∶2配比移栽效果最好,移栽成活率可以达到96.11%,同时根系活力、株高增长量、地径、新生叶片数、叶长,叶宽,光合色素含量等均可以达到优良状态。