S-层蛋白是乳杆菌表面结构的主要成分,占细胞总蛋白的10%-15%,占网格表面的70%。据报道S-层蛋白对乳杆菌益生菌的作用有积极的贡献。目前关于S-层蛋白对宿主细胞的线粒体凋亡通路的影响的研究较少,所以本课题以H₂O₂作为氧化损伤刺激物,研究从Lactobacillus paracasei subsp.paracasei M5-L、Lactobacillus casei Q8-L及Lactobacillus rhamnosus GG（LGG）三种乳酸杆菌上分离的S-层蛋白对HT-29细胞的线粒体凋亡通路的影响。本研究采取5 mol/L的LiCl提取S-层蛋白,并利用1 mol/L的LiCl通过盐析的方法来纯化粗提蛋白,SDS-PAGE检测表明三株菌均在43 kDa处有单一条带。选择不同浓度S-层蛋白作用细胞,经MTT实验最终确定其作用浓度为150μg/mL,活菌体与热灭活菌体的浓度为10⁷ cfu/mL和10⁸ cfu/mL,H₂O₂与细胞作用的最佳浓度是0.8 mM,作用时间为6 h进行后续实验。MTT实验证实作用时间为6 h时,三种S-层蛋白、活菌体与热灭活菌体能够抑制H₂O₂对HT-29细胞增殖的影响。检测HT-29细胞抗氧化酶系统的T-AOC、SOD、CAT、MDA和LDH五个指标,实验证明三种S-层蛋白可以通过提高T-AOC、SOD和CAT的含量,降低MDA和LDH的含量,进而拮抗H₂O₂对HT-29细胞的影响。三种S-层蛋白的各处理组对H₂O₂导致的Caspase-3和Caspase-9活性的异常具有显著的正向调节作用。实验结果表明,三种S-层蛋白均能通过降低其的活化作用进而减缓H₂O₂引起的HT-29的凋亡。通过流式细胞仪对三种S-层蛋白及H₂O₂对HT-29细胞中线粒体膜电位的变化及对细胞中Ca²⁺的影响两个凋亡指标的研究,进而确定M5-L的S-层蛋白（预防组）拮抗H₂O₂对HT-29的作用效果最佳,所以最终选择M5-L的S-层蛋白（预防组）来进行细胞凋亡机制部分的研究。为探讨三种S-层蛋白拮抗H₂O₂的机制,利用qRT-PCR检测HT-29细胞线粒体凋亡通路相关mRNA表达情况,实验结果表明:S-层蛋白可以通过降低APAF-1、Caspase-3、Caspase-9、CytC、Smac和Bid基因的表达量,升高XIAP和Bcl-2基因的表达量,进而通过线粒体细胞凋亡通路来抑制H₂O₂诱导的细胞凋亡作用。由于AIFM1和ENDOG基因相对其他基因表达含量过少,从本实验的结果看各组的AIFM1和ENDOG的变化趋势不是很有规律,是否M5-L的S-层蛋白通过非Caspase依赖的AIFM1和ENDOG途径抑制细胞调亡仍有待进一步研究。