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目的:建立H2O2诱导的小鼠TKE2细胞和角膜氧化应激的体内外模型,通过添加ROCK抑制剂Y-27632,研究Y-27632对角膜上皮的保护性作用及其机制。方法:(1)应用小鼠角膜上皮干/祖细胞系(TKE2)作为细胞模型,用无BPE(牛垂体提取物)的培养基处理2小时,而后用含Y-27632的培养基预干预2小时,再用200μM H2O2处理2小时,24小时后检测细胞内ROS(活性氧自由基)水平、细胞增殖以及NOX4、NRF2的表达情况;收集细胞提取mRNA,定量PCR检测NRF2下游基因的表达情况;(2)选择6-8周龄Balb/C小鼠,随机分为4组,1组为对照组,另外3组采用5μl500μM H2O2角膜局部处理30分钟,而后分别采用PBS(磷酸盐缓冲液)、BSA(牛血清白蛋白)或Y-27632进行干预;一组4小时后取材,二组12小时后再次给予PBS、BSA或Y-27632干预,24小时后取材,分别行ROS、TUNEL、NOX4、NRF2的免疫荧光染色及H.E染色。结果:Y-27632干预可以显著抑制H2O2诱导的小鼠TKE2细胞和小鼠角膜的氧化应激反应,并呈现典型的时间效应。作用机制包括以下几点:(1)Y-27632通过抑制H2O2诱导的NOX4的表达上调,降低了细胞在H2O2诱导下ROS水平的过度累积(;2)Y-27632抑制了H2O2诱导的NRF2通路的活化,以及下游HO-1、NQO-1、catalase等因子的过度表达,从而避免了NRF2信号通路过度活化引起的细胞应激反应。结论:ROCK抑制剂Y-27632主要通过抑制NOX4表达和NRF2信号通路过度活化,降低细胞内ROS水平,从而起到保护角膜上皮细胞的作用。