【摘 要】
:
近年来,由于胰腺癌早期症状隐匿以及诊断技术的不足,5年相对生存率不到10%,因此,开发具有高灵敏度的胰腺癌检测策略迫在眉睫。核酸等温扩增反应因其具有极高的放大效率以及不需要精准的控温仪器而展现出卓越的优势。在本论文中,我们借助荧光仪或者紫外分光光度计等仪器为信号输出,设计了两种等温扩增技术(杂交链式反应和滚环扩增)分别对胰腺癌细胞或者胰腺癌外泌体进行了高灵敏度检测,在实际样品检测中具有良好的应用前
论文部分内容阅读
近年来,由于胰腺癌早期症状隐匿以及诊断技术的不足,5年相对生存率不到10%,因此,开发具有高灵敏度的胰腺癌检测策略迫在眉睫。核酸等温扩增反应因其具有极高的放大效率以及不需要精准的控温仪器而展现出卓越的优势。在本论文中,我们借助荧光仪或者紫外分光光度计等仪器为信号输出,设计了两种等温扩增技术(杂交链式反应和滚环扩增)分别对胰腺癌细胞或者胰腺癌外泌体进行了高灵敏度检测,在实际样品检测中具有良好的应用前景。具体研究内容如下:1.本研究应用Fe3O4@DOP NPs荧光猝灭和磁分离的能力,以及适配体-引发剂(Apt-Trigger)引发的杂交链式反应(Hybridization Chain Reaction,HCR)协同检测胰腺癌细胞中过表达的MUC1蛋白。将HCR底物(H1和H2)修饰FAM荧光,三种胰腺癌细胞系的检测限为21~41 cells/m L。胰腺癌细胞的荧光强度明显高于正常胰腺细胞(HPDE-C7)和肝癌细胞(Hep G-2),因此我们所提出的检测策略具有良好的选择性。此外,我们还利用HCR扩增体系对胰腺癌组织进行成像,成像结果与传统的免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)结果一致,说明我们设计的检测策略在临床实际应用中具有潜在价值。2.在这项工作中,我们开发了一种简单、灵敏、快速的外泌体诊断方法,有助于癌症的早期诊断和预后跟踪。我们巧妙地将外泌体检测转化为核酸放大检测,首先,将CD63 aptamer/c-DNA连接到磁球上作为捕获探针,当外泌体存在时,其生物标志物CD63与适配体识别并结合,从而释放c-DNA探针作为引物启动滚环扩增(Rolling Circle Amplification,RCA)反应。由于RCA产物是一条带有负电的长单链DNA,会使带有正电荷的银纳米颗粒(Ag NPs)聚集,从而通过紫外-可见光谱的变化或者肉眼观察聚集程度来判断外泌体的浓度。分光光度法对外泌体的检测限达到4×10~3 particles/m L,具有较好的灵敏度。此外,该检测方法也能够实现在血清样品中外泌体检测。3.外泌体因其具有独特的生物学特性,在疾病早期诊断方面越来越备受关注,然而传统的分析方法(PCR或者ELISA)不能区分不同来源的外泌体。因此我们开发了一种基于上转换纳米颗粒(UCNPs)的荧光生物传感检测平台,实现了胰腺癌细胞来源的过表达表皮生长因子受体(EGFR)和上皮细胞粘附分子(Epcam)外泌体的超灵敏多元检测。本实验使用修饰CD63抗体的磁球来捕获外泌体,捕获的外泌体被两种DNA适配体(EGFR和Epcam)分别特异性识别,通过RCA扩增产生一段长的DNA重复序列(RCA产物),最后,加入与RCA产物互补的UCNPs-DNA,进一步对RCA产物进行荧光标记和信号放大。利用这种多元检测平台,外泌体的检测限低至3×10~3 particles/m L。此外,该方法还可通过磁球聚集程度判断是否存在表达两种蛋白的外泌体,为外泌体的多元检测奠定基础。
其他文献
许多学者认为,联合国维和行动在处理武力冲突时通常发挥正面的作用。维和部队的部署是为了以遏制冲突的爆发、升级、持续和反复,其在促进稳定并最终实现长久和平和安全中发挥着至关重要的作用。维和行动帮助处于冲突中的国家创造条件以实现可持续的和平。20世纪90年代以来,维和行动已成为国际社会应对国际政治危机的基石。时至今日,联合国维和行动扩展了行动范围,涵盖了为解决国家间冲突的复杂多维度行动。由于维和行动的开
早期研究表明RNA分子负责细胞的多种功能,包括遗传信息的转录和翻译,分子作用元件的结构性支撑,调控基因表达或沉默及催化功能等。掌握RNA的动态迁移,包括实时定位、起点和终点,有助于我们研究细胞在健康和疾病状态下的行为和功能,加深对RNA的认识。人们开发了多种RNA成像技术,应用于RNA的亚细胞定位成像。RNA原位杂交(FISH)作为主流的RNA成像系统,实现了高分辨率的RNA亚细胞成像,但RNA
手足口病是一种由多种人类肠道病毒感染引起的传染性疾病,多发于5岁以下儿童。其主要特征是发热和手、足、口腔等部位出现皮肤粘膜皮疹、疱疹和溃疡等病症。该病于1957年首次在新西兰报道,随后在全球范围内传播流行,现已成为全球性的公共卫生问题。相比其它肠道病毒,肠道病毒71型(Enterovirus71,EV71)更易引起中枢神经系统症状,是引发手足口病重症病例的主要病原体,对患者的危害性更大。对于手足口
计算思维是义务教育信息科技学科核心素养的重要内涵之一。在新课标背景下,以过程探究为导向,以思维激荡为重点,以任务拆解为内核,以合作实践促生长,建构起计算思维培养的“螺旋”式学习圈,达成理念与思维在课内外的内在与统一,知识与技能在教与学中的同向与融合。
近年来,甲状腺结节检出率显著升高,不同病理类型的甲状腺癌存活率不同,但大多数甲状腺癌预后较好。这使得对恶性结节尽早做出明确诊断至关重要,超声引导下细针穿刺细胞学检查(ultrasound-guided finenee dleaspiration biopsy,US-FNAB)是甲状腺结节术前定性诊断的主要方法,但其最主要的缺点在于标本无法诊断或不满意(Bethesda Ⅰ类),其影响因素为操作者熟
猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea,PED)主要症状为呕吐、水样腹泻、脱水和体重下降,猪流行性腹泻病毒(Porcine Epidemic Diarrhea Virus,PEDV)为猪肠道腹泻的主要病原,PEDV作为危害中国养猪业的重要病原体,其引发疫病给养猪业造成巨大损失。有研究表明PEDV感染不能使机体产生快速而强烈的天然免疫反应,提示它可能通过某些策略来逃避宿主细
近些年,随着单分子科学的发展,科学家逐步从对宏观物质及其反应特征的研究,转移到对微观体系的研究。一系列单分子检测技术被开发且应用于对分子本身的特征及分子间差异的研究,比如,单分子光谱和单分子力谱等技术,被用于监测单分子行为和化学动力学过程等。虽然这些技术解决了很多用传统集成手段无法解决的问题,但同样存在缺陷。比如,只能基于固体表面检测、对样品表面性状要求高、需要荧光标记以及样品准备过程繁琐等。为弥
金黄色葡萄球菌(金葡菌)广泛存在于自然界以及人和动物的皮肤和腔道粘膜表面,可导致多种畜禽的皮肤软组织感染以及乳腺炎、肺炎和菌血症等疾病,是一种严重危害畜禽养殖和人类健康的革兰氏阳性机会致病菌。目前,抗生素耐药性是治疗金葡菌感染最大的挑战,耐药性金葡菌,尤其是耐甲氧西林金葡菌(MRSA)已成为引起动物感染以及经食物链传播的主要耐药病原菌。另一方面,我国畜禽养殖业进入“限抗”和“减抗”时代,金葡菌感染
背景:癌症是威胁人类健康的重要隐患之一,中国癌症发病率,死亡率均位居全球第一。鉴于癌症的高风险和高死亡率,世界各地的研究人员一直在努力开发更准确、更快速有效的治疗方法来攻克癌症这一重大难题。传统的癌症治疗包括手术治疗、放射治疗和化学药物治疗等,具有严重的副作用和耐药复发等一定的局限性,因此寻找新的疗法和开发更有效的治疗策略来应对癌症的弊端具有重要的意义。在众多癌症治疗的前沿研究中,纳米医学一直是科